桥本氏甲状腺炎患者SIRT1表达增高导致FOXP3乙酰化水平降低及调节性T细胞数量和功能异常

摘要

目的:桥本氏甲状腺炎是一种以FOXP3蛋白表达下降和调节性T细胞(Treg)功能缺陷为特点的甲状腺自身免疫性疾病。该研究的主要目的是探索在桥本氏病中Treg功能异常的机制以及治疗和干预的可能性。
　　研究方法:通过流式细胞分析法分析桥本氏病组(HT)，结节性甲状腺肿组(NG)以及健康对照组(HC)外周血中的CD4+T细胞，并确定CD4+CD25+Treg及CD4+CD25+FOXP3+T细胞在总CD4+T细胞中的百分比。通过蛋白印迹法分析CD4+T细胞中FOXP3蛋白及SIRT1的表达情况。为了对SIRT1起到干预作用，我们在培养后的CD4+T细胞中给予/未给予SIRT1的特异性抑制剂Ex-527。CD4+T细胞中FOXP3蛋白乙酰化水平通过免疫沉淀及蛋白印迹法进行测量分析。通过CFSE试验的方法检测Treg的抑制功能。
　　结果:1.在桥本氏病患者中， CD4+CD25+T细胞在CD4+T细胞中所占比例与NG及HC组相比明显减少，FOXP3蛋白的表达及乙酰化水平与NG及HC组相比也存在明显减少的现象。相反，SIRT1在HT组中的表达与另外两组相比却明显增加。2.在培养后的CD4+T细胞中加入SIRT1的特异性抑制剂后，Ex-527干预后的桥本氏病患者(HTE)的CD4+CD25+T细胞在CD4+T细胞中所占比，FOXP3蛋白的表达及乙酰化水平与未加进行Ex-527干预的HT组相比出现明显提高，并接近于正常组中的水平。3.CFSE抑制功能试验显示，HT组中Treg的抑制能力与NG和HC组相比明显下降，而通过Ex-527进行干预后Treg的抑制功能得到了明显改善，并接近于正常组水平。
　　结论:我们的研究发现证明，桥本氏病中FOXP3蛋白表达的下降及Treg功能的异常受SIRT1介导的FOXP3的异常乙酰化所调控。一种SIRT1特异性抑制剂Ex-527可能会上调桥本氏病患者的FOXP3乙酰化水平进而增加Treg的而数量及增强Treg的抑制功能。

目录

声明

摘要

英文缩略语

1 前言

2．1 主要试剂和仪器

2．1．1 主要试剂

2．1．2 主要仪器

2．2 研究对象和分组

2．3 实验方法

2．3．1 分离外周血单核细胞与CD4+T细胞

2．3．2 流式细胞分析

2．3．3 细胞总蛋白提取

2．3．4 蛋白定量

2．3．5 蛋白样品制备

2．3．7 细胞培养及SIRT1表达的抑制

2．3．8 免疫沉淀反应和FOXP3乙酰化水平测定

2．3．9 免疫磁珠法分选CD4+CD25+Tregs细胞以及CD4+CD25-效应性T细胞

2．3．10 Treg的抑制试验

2．4 统计学分析

3．1 研究对象基本情况

3．2 CD4+CD25+FOXP3+T细胞数量在桥本氏病患者中显著降低

3．3 CD4+T细胞中FOXP3和SIRT1的蛋白表达

3．4 桥本氏病患者中抑制SIRT1蛋白的表达可以增加FOXP3蛋白的表达及乙酰化的水平

3．5 桥本氏病患者中抑制SIRT1蛋白表达后CD4+CD25+FOXP3+T细胞数量增加

3．6 桥本氏病患者中抑制SIRT1蛋白表达可增加Treg的抑制功能

4 讨论

5 结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 自身免疫性疾病桥本氏甲状腺炎特点概述

致谢

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