Rho激酶抑制剂对大鼠压力负荷性心力衰竭保护作用的研究

摘要

目的:探讨Rho激酶抑制剂是否对压力负荷性心力衰竭大鼠具有保护作用，为有效治疗压力负荷性心力衰竭提供新的理论依据和思路。
　　方法:80只8周龄雄性SD大鼠分成假手术组、手术组;手术中依据干预方式将手术组平行分成三组:安慰剂组、依立卢2 mg/kg/d组（低剂量给药组）和依立卢10 mg/kg/d组（高剂量给药组），每组各20只。建立压力负荷心力衰竭大鼠模型，然后分别给予以下处理假手术组:生理盐水10 mg/kg腹腔注射，每日1次;安慰剂组:生理盐水10 mg/kg腹腔注射，每日1次;低剂量给药组:依立卢2mg/kg腹腔注射，每日2次;高剂量给药组:依立卢10mg/kg腹腔注射，每日2次，所有大鼠术后干预3周，饲养至第7周后，采用小动物高频超声检测不同组大鼠心率，室间隔厚度(IVSD)，左室后壁舒张末期厚度(LVPWd)，和左室后壁收缩期末期厚度(LVPWs)。然后每组随机选取6只，有创性测量左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室内压最大上升/下降速率(±dp/dtmax)。对其余大鼠称体重(BW)，麻醉后处死，暴露心脏，取部分大鼠心肌行HE和Masson染色。另取大鼠心肌组织，行Real-timePCR和Westem blot检测，检查黑色素瘤分化相关基因5(MDA5)、肌醇依赖酶1(IRE1α)、超氧化物歧化酶-1(SOD-1)、核转录相关因子-2(Nrf2)、Kelch样ECH相关蛋白-1(Keap1)mRNA水平和蛋白质表达水平。再用ELISA法检测血清MDA5、IRE1α、SOD-1、Nrf2和keap1蛋白表达。
　　结果:建立压力负荷心力衰竭大鼠模型后，予依立卢处理后2组高频超声测定左心室IVSD、LVPWd、LVPWs明显下降，差异具有统计学意义(P＜0.05)，与低剂量给药组相比，高剂量给药组IVSD、LVPWd、LVPWs下降更低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。建模后各组大鼠左室压力波动明显增大，心率加快，LVSP、±dp/dtmax绝对值明显降低，LVDEP明显升高，差异具有统计学意义(P＜0.05)，说明慢性心衰模型建立成功。依立卢干预后LVSP、±dp/dtmax绝对值明显上升，LVDEP明显下降（*P＜0.05），且高剂量组变化更为明显(＃P＜0.05)。且依立卢处理后，大鼠心脏重量指数明显下降（*P＜0.05），但低剂量与高剂量组间无明显差异（P＞0.05）。光镜下病理结果显示安慰剂组心肌细胞破坏明显，心肌纤维断裂溶解，心肌横纹消失，大量炎性细胞浸润。依立卢给药组横纹肌破坏减少，炎性细胞浸润及肉芽组织少量生成，且高剂量给药组横纹肌破坏程度及肉芽组织生成少于低剂量给药组。大鼠心肌氧化应激指标MDA5、IRE1α mRNA水平及心肌MDA5、IRE1α蛋白表达均明显升高(P＜0.05)，抗氧化应激指标SOD-1mRNA水平及SOD-1蛋白表达量均明显降低(P＜0.05)，差异具有统计学意义;血清氧化应激指标MDA5、IRE1α蛋白水平明显升高（P＜0.05），抗氧化应激指标SOD-1蛋白水平明显降低(P＜0.05)。应用依立卢处理后，大鼠心肌MDA5、IRE1αmRNA水平及心肌MDA5、IRE1α蛋白表达量均明显下降，心肌SOD-1 mRNA水平及心肌SOD-1蛋白表达量及其均明显升高（*P＜0.05），血清MDA5、IRE1α蛋白水平均明显下降（*P＜0.05），抗氧化应激指标SOD-1蛋白水平明显升高（*P＜0.05）。且依立卢对MDA5、IRE1α、SOD-1的调节能力具有剂量依赖性（＃P＜0.05）。依立卢处理后，大鼠心肌和血清Nrf2、keap1 mRNA水平及Nrf2、keap1蛋白表达量均明显上调（*P＜0.05），且高剂量给药组上调效果明显高于低剂量给药组（＃P＜0.05=。
　　结论:1.Rho激酶抑制剂（依立卢）能减轻压力负荷性心力衰竭心肌损伤，降低炎性细胞浸润及抑制肉芽组织生成。
　　2.Rho激酶抑制剂（依立卢）通过降低促氧化应激MDA5和IRE1α蛋白表达，提高抗氧化应激SOD-1蛋白表达，抑制了压力负荷性大鼠心肌重构。
　　3.Rho激酶抑制剂（依立卢）通过调控氧化应激Nrf2/keap1通路，从而调控氧化应激的发生，进而改善心功能。

目录

声明

摘要

英文缩略语

1 前言

2．1 实验材料

2．1．1 实验动物

2．1．2 试剂耗材

2．1．3 仪器设备

2．2 实验方法

2．2．1 实验分组

2．2．2 压力负荷心力衰竭大鼠模型构建

2．2．3 小动物超声检测

2．2．4 血流动力学监测

2．2．5 心脏重量指数(HWI)

2．2．6 病理学观察

2．2．7 Real-time PCR法检测MDA5、IRE1α、SOD-1、Nrf2和keap1 mRNA表达

2．2．8 ELISA法检测血清MDA5、IRE1α、SOD-1、Nrf2和keap1蛋白表达

3 统计学处理

4．1 术后大鼠状态监测比较

4．2 动物超声结果

4．3 血流动力学参数比较

4．4 心脏重量指数比较

4．5 病理形态学观察

4．6 Real-time PCR法和ELISA检测氧化应激结果

4．7 Real-time PCR和ELISA法检测氧化应激Nrf2／keap1通路结果

4．8 Western blot检测氧化应激蛋白及通路改变

5 讨论

6 结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 Rho激酶抑制剂对心力衰竭保护作用的研究进展

致谢

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