冷诱导RNA结合蛋白对大鼠体外循环的心肌保护作用的实验研究

摘要

目的:心脏外科术后心功能是影响患者预后情况的重要因素之一。体外循环是大部分心脏手术必不可少的环节，但仍然在体外循环过程中会产生炎症反应以及造成脏器的损伤。冷诱导RNA结合蛋白(Cold-induced RNA bending Protein，CIRP)在低温、紫外线、缺氧等应激条件下，被诱导表达通过细胞核迁移至细胞质而广泛表达，通过与多种mRNA结合，增加mRNA的稳定性从而抗细胞凋亡等发挥细胞保护作用。本实验通过建立大鼠体外循环模型研究低温缺血缺氧条件下的CIRP对大鼠心肌的保护作用及作用机制。其对于心肌的保护是值得研究的方向。
　　研究方法:本研究构建CIRP慢病毒过表达载体，通过尾静脉注射CIRP慢病毒过表达载体转染大鼠，并对大鼠构建立体外循环模型。雄性SD大鼠(300g-350g)分为假手术组组(RC)、正常大鼠体外循环组(RCPB)、转染阴性病毒体载体外循环组(RNCCPB)、转染CIRP慢过表达病毒载体体外循环大鼠组（RCIRPCPB）。通过股动脉、颈静脉建立体外循环，转中流量100-150mL/kg/min，降温至15-18℃后心脏停跳，停跳1h后复温完成体外循环。对体外循环后大鼠术后24h、72h的心功能进行评估。术后72h后处死大鼠，取大鼠心肌组织，利用Real-time PCR检测组织CIRP转染情况。利用Tunel及Western Blot方法检测凋亡相关指标以及评价氧化应激相关指标。
　　结果:成功建立转染CIRP过表达大鼠模型，体外循环后各组大鼠心肌组织进行Real-time PCR提示转染CIRP过表达慢病毒载体后RCIRPCPB组CIRP基因较RCPB、RNCCPB组明显升高。Western Blot检测RCIRPCPB组心肌组织中CIRP表达明显高于RCPB、RNCCPB组(P＜0.01)。心肌组织免疫组化提示CIRP表达分布于细胞质中，转染CIRP慢病毒过表达载体后心肌CIRP表达明显升高（P＜0.01）。TUNEL染色提示RCIRPCPB组心肌组织凋亡较RCPB(P＜0.01)和RNCCPB(P＜0.01)明显减少。Western Blot检测各组大鼠心肌组织凋亡相关指标Bax、Survivin、Caspase-3表达情况，RCIRPCPB组大鼠组心肌Bax表达较RCPB(P=0.013)和RNCCPB(P＜0.01)明显降低，Survivin表达明显高于RCPB(P=0.032)和RNCCPB(P=0.037)，Caspase-3 p12表达明显低于RCPB(P＜0.01)和RNCCPB(P＜0.01)。AKT在各组间未见明显差异，RCIRPCPB组中p-AKT在明显高于RC(P＜0.01)、RCPB(P＜0.01)和RNCCPB(P＜0.01)，RCPB和RNCCPB无明显差异。体外循环后3天评估大鼠心功能EF值，RCIRPCPB组术后24h EF值RCPB(P＜0.01)和RNCCPB(P＜0.01)升高。
　　结论:经尾静脉注射CIRP慢病毒后可建立稳定转染大鼠心肌的模型，经体外循环逐渐降温，心肌细胞中CIRP明显增加，从而促使心肌细胞凋亡减少。CIRP可通过调节AKT信号通路激活抑制细胞凋亡并降低对超氧化物歧化酶抑制起到细胞保护作用，改善了心功能。

目录

声明

摘要

英文缩略语

第一部分：建立大鼠深低温停循环模型及心功能评价

1 前言

2．1 主要试剂和仪器

2．2 研究对象和实验分组

2．3 实验方法

3．1 大鼠体外循环基本情况

3．2 心功能评估

4 讨论

第二部分：冷诱导RNA结合蛋白抑制大鼠心肌组织凋亡

1 前言

2．1 主要试剂和仪器

2．2 研究对象和实验分组

2．3 实验方法

3 结果

3．3 大鼠心肌组织CIRP表达情况

3．4 大鼠心肌组织凋亡情况

3．5 大鼠心肌组织MnSOD活性

3．6 大鼠心肌组织MDA含量

4 讨论

结论

本研究独创性声明

参考文献

综述 冷诱导RNA结合蛋白对心肌的保护作用的研究进展

致谢

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