NLK通过Notch和Wnt/β-catenin信号通路调控非小细胞肺癌细胞增殖的分子机制研究

摘要

目的:研究Nemo样激酶(Nemo-like kinase，NLK)在非小细胞肺癌(non-small celllung cancer，NSCLC)中的表达与患者临床特征关系以及对NSCLC增殖能力的作用。探讨NSCLC对Notch和Wnt/β-catenin信号通路活性的影响及其机制。
　　研究方法:1.采用免疫组化（immunohistochemistry，IHC）方法检测109例NSCLC患者石蜡组织切片中NLK、β-Catenin和TCF4的表达情况，并结合NSCLC患者临床病理资料分析NLK与NSCLC患者的年龄、性别、肿瘤分级、临床分期、淋巴结转移等因素的关系。2.选择非小细胞肺癌细胞中的A549，H1299两种细胞系，转染或siRNA干扰NLK表达。采用CCK-8实验检测A549及H1299细胞增殖活性;采用集落实验检测NLK对A549和H1299细胞的增殖能力的影响。3.A549，H1299两种细胞系经过干扰或转染NLK后采用Western blot(WB)技术检测Notch和Wnt/β-catenin信号通路中关键因子P53、CyclinD3、HES1、β-catenin的表达情况，通过检测靶基因P53、CyclinD3、HES1、β-catenin表达探讨NLK对Notch和Wnt/β-catenin通路活性的影响。
　　结果:1.IHC实验显示NLK的核表达在肺癌中高于相应的正常肺组织中。NLK的高表达和TCF4的表达呈负相关，同时跟β-catenin.的膜性表达呈正相关(P＜0.05)。NLK的高表达在肺鳞癌中比腺癌中更常见。但是，NLK的表达跟患者年龄、性别、分化、TNM分期、淋巴转移无明显相关性(P＞0.05)。2.CCK8实验结果显示在A549和H1299细胞中，随培养时间的延长，control组，mock组细胞的增殖率显著高于NLK干扰组，但又显著低于NLK转染组(P＜0.05)。细胞集落实验结果显示在A549和H1299细胞中，与对照组相比，NLK干扰组中细胞克隆能力显著增强，而在NLK转染组中细胞克隆能力明显下降(P＜0.05)。3.A549和H1299细胞经NLK干扰后，CyclinD3、HES1、β-catenin蛋白表达显著高于control组和mock组，P53蛋白表达显著低于control组和mock组(P＜0.05)。A549细胞经NLK转染后，CyclinD3、HES1、β-catenin蛋白表达显著低于control组和mock组，P53蛋白表达实验组显著高于control组和mock组(P＜0.05)。所有实验中control组和mock组之间无统计学差异(P＞0.05)。
　　结论:1.肺癌中NLK的表达显著高于正常肺组织，其中NLK的高表达在肺鳞癌中更常见。2.NLK能够显著抑制肺癌细胞的增殖水平。3.NLK能够抑制Notch和Wnt/β-catenin信号通路中关键因子的表达。

目录

声明

摘要

英文缩略语

1 前言

2 材料与方法

2．1 材料

2．2．方法

2．4 统计分析

2．5 光密度分析

3 结果

3．1 NLK在肺癌中的表达显著高于相应的正常肺组织

3．2 NLK的表达水平能够影响肺癌细胞的增殖能力

3．3 NLK的表达水平能够调控Notch和Wnt／β-catenin信号通路中关键因子的表达

4 讨论

本研究创新性自我评价

参考文献

综述 Wnt通路与Notch通路交互调控的研究进展

在学期间科研成绩

致谢

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