新候选抑癌基因INPP4B在胃癌中的表达情况及其与EB病毒感染的相关性研究

摘要

肿瘤的发生、发展是包含癌基因激活和抑癌基因失活等机制的多因素、多阶段过程。在肿瘤的的发生发展过程中，PI3K/AKT通路发挥着非常重要的作用，它参与了细胞的多项生物学功能，如细胞的生长、增殖、凋亡、转移、血管的生成和葡萄糖的代谢。PI3K通路是与细胞外生长因子酪氨酸激酶的衔接而开始，衔接后可使PI3K募集于血浆质膜锚定受体(plasma membrane anchor receptor)从而使其激活。PI3K的活化可增加细胞内PI(3，4)P2和PI(3，4，5)P3的含量，多种信号蛋白，如Ser/Thr激酶Akt和PDK1，可以与这些PI3K的脂质产物结合，从而锚定于质膜上，最终发挥促进细胞的生长、增殖和存活的功能。
　　PI3K信号通路可被磷酸酶通过下调PI(3，4，5)P3的作用而终止。PTEN基因的蛋白产物在PI(3，4，5)P3的3位去磷酸化，产生PI(4，5)P2。将PI(3，4，5)P3的5位去磷酸化的SHIP家族磷酸酶等，产生PI(3，4)P2。PTEN蛋白的表达下降或者功能缺失，从而导致PI3K信号通路异常，是多种肿瘤的重要生物学特征。
　　INPP4B基因（inositol polyphosphate4-phosphatase，typeⅡ）位于染色体4q31.2区域，其蛋白产物为多磷酸肌醇-4-磷酸酶，Ⅱ型，可以使质膜上的PI(3，4)P2（3，4-二磷酸磷脂酰肌醇），水解成PI(3)P（磷脂酰肌醇-3-磷酸），因其在PI3K/Akt信号传导通路中发挥着类似于PTEN蛋白的负性调节作用，被认为是一个新的候选抑癌基因。目前，有研究表明INPP4在乳腺癌，前列腺癌等中发挥着重要作用，但在胃癌中的表达情况和失活机制尚不清楚。
　　本课题利用免疫组织化学技术对胃癌患者手术标本进行检测，对比癌组织与癌旁正常组织中INPP4B蛋白的表达情况。考察了在胃癌组织中INPP4B的表达情况，并分析了INPP4B表达与临床病理特征的关系。采用Western blot技术检测了INPP4B蛋白在多种胃癌细胞系中的表达。采用原位杂交的方法检测胃癌组织中EB病毒的感染情况，并分析INPP4B蛋白的表达情况与EB病毒感染的相关性。为寻找INPP4B基因失活的可能原因，提供了参考资料。
　　第一部分 INPP4B蛋白在胃癌组织及胃癌细胞系中的表达情况的研究
　　目的:探究胃癌中INPP4B蛋白的表达情况及其与临床病理特征的相关性。
　　研究方法:1.采用免疫组织化学的方法，对301例胃癌患者的石蜡标本进行检测，2.采用Western blot技术检测INPP4B蛋白在正常胃粘膜细胞系GES-1和胃癌细胞系AGS、MKN1、MKN45、SGC-7901、BGC-823中的表达。3.采用卡方检验或Fisher's确切概率法分析免疫组化检测的胃癌标本中INPP4B蛋白的不同表达状态与其临床病理特征的相关性。
　　结果:301例胃癌标本中，146例(48.5％)癌组织的INPP4B蛋白表达降低，35例(39.9％)癌组织的INPP4B蛋白表达与癌旁组织相同，20例(11.6％)癌组织的INPP4B蛋白表达升高。INPP4B蛋白的不同表达状态与其癌组织的分化程度（P=0.003）与生长方式（P=0.01）之间的差异有统计意义。低分化以及弥漫生长的肿瘤中，INPP4B表达下降的频率更高。INPP4B在5个胃癌细胞系中的2个（MKN1、BGC-823）阴性表达。
　　结论:INPP4B蛋白表达的下降在胃癌中频发，并且与癌细胞分化程度与生长方式相关。在低分化与弥漫生长的胃癌组织中，INPP4B蛋白的表达下降的频率更高，而在中分化、高分化与团块生长、巢状生长的胃癌组织中INPP4B蛋白多为正常表达或表达升高。
　　第二部分 EB病毒相关胃癌中INPP4B蛋白表达情况的研究
　　目的:探究胃癌组织中INPP4B蛋白表达的变化与EB病毒感染的相关性。
　　研究方法:采用原位杂交的方法，检测272例胃癌患者的癌组织中EB病毒的感染情况，并采用卡方检验或Fisher's确切概率法，分析EB病毒的感染与胃癌临床资料的关系及其与INPP4B蛋白表达情况的相关性。
　　结果:通过原位杂交的方法对272例胃癌石蜡标本的EB病毒感染情况进行检测，其中阳性40例，阴性232例，其中有193例在第一部分实验中进行了免疫组化检测。其中EBV阴性中INPP4B表达降低的84例，表达正常或升高的80例，EBV阳性的病例中，INPP4B表达降低的21例，表达正常或升高的8例，经过卡方检验得出p=0.043。
　　结论:在EB病毒阳性的胃癌组织中，INPP4B表达下调的比率增高。

目录

声明

摘要

英文缩略语

第一部分 INPP4B蛋白在胃癌组织及胃癌细胞系中的表达情况的研究

1 前言

2 材料和方法

2．1 主要试剂和仪器

2．2 方法

3 结果

3．1 INPP4B在胃癌组织中的表达情况

3．2 INPP4B蛋白的不同表达状态与临床病理特征之间的关系

3．3 INPP4B蛋白在部分胃癌细胞系中表达下调

4 结论

5 讨论

第二部分 EB病毒相关胃癌中INPP4B蛋白表达情况的研究

1 前言

2．1 主要试剂和仪器

2．2 方法

3 结果

3．1 胃癌组织中EB病毒感染的基本情况

3．2 EBV感染与胃癌组织的临床病理特征的相关性

3．3 EBVaGC患者的Kaplan Meier生存分析

3．4 INPP4B基因的在胃癌组织中的表达下调与EB病毒的感染有关

4 结论

5 讨论

总结

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 INPP4B基因在肿瘤研究中的进展

攻读学位期间取得的研究成果

致谢

个人简历