微管蛋白及微管相关蛋白在PTSD大鼠海马神经元表达变化的研究

摘要

目的:创伤后应激障碍（Post traumatic stress disorder, PTSD）患者出现海马结构功能变化和临床表现的记忆功能障碍有密切联系。神经元微管与记忆变化调节密切联系。那么微管蛋白及微管相关蛋白是否参与调节PTSD患者记忆异常还没有相关报道。所以本研究利用单一连续性刺激(single prolonged stress，SPS)构建PTSD大鼠模型，观察SPS大鼠空间记忆变化及海马神经元数量及其形态超微结构的改变。通过观察微管蛋白β-tubulin、微管相关蛋白MAP1B，Tau以及磷酸化tau和微管解聚的标识蛋白Stathmin的表达变化。利用微管骨架稳定性指示蛋白Acetyl-α-tubulin的表达变化探讨SPS大鼠海马神经元微管蛋白及微管相关蛋白的异常表达及微管聚合的稳定性。利用条件性厌恶味觉(Conditional tasteaversion，CTA)实验检测大鼠海马神经元微管蛋白及微管相关蛋白是否参与记忆过程，如果是的话，SPS大鼠海马神经元微管蛋白及其相关蛋白的异常表达则有可能与SPS引起的记忆异常有关。研究结果将为搞清楚创伤后应激障碍引起记忆受损的发病机制提供可靠的实验依据。同时也为记忆的相关机制的研究提供新的线索。
　　方法:第一部分的研究应用了单一连续性刺激大鼠的方法构建PTSD模型。通过水迷宫定位游泳实验检测大鼠在空间认知方面变化。应用DAPI染色的方法检测海马神经元的数量变化。应用透射电镜技术检测大鼠海马神经元形态结构的变化。应用免疫荧光方法和免疫组织化学方法，检测大鼠海马中tau，MAP1B，β-tubulin，Acetyl-α-tubulin，stathmin的免疫反应性。采用免疫印迹方法检测tubulin、tau、p-tau、MAP1B、Acetyl-α-tubulin、Stathmin的蛋白变化。第二部分单一连续性刺激法构建大鼠PTSD模型，应用条件性味觉厌恶实验检测大鼠的厌恶记忆能力。同时采用免疫印迹方法检测大鼠海马组织中β-tubulin、tau、MAP1B蛋白的表达变化。
　　结果:1、水迷宫定位航行实验的分析发现SPS大鼠与对照组大鼠相比空间记忆能力下降。2、DAPI染色及透射电镜技术发现SPS大鼠海马神经元数量减少，神经元形态及结构发生改变。3、应用免疫印迹方法、免疫荧光及免疫组织化学方法检测等发现了SPS大鼠海马中tau，MAP1B，β-tubulin，Acetyl-α-tubulin的免疫反应性及蛋白表达增多;p-tau及stathmin的免疫反应性及蛋白表达减少。4、CTA味觉厌恶实验发现SPS大鼠的厌恶性记忆受损。5、免疫印迹结果显示大鼠海马神经元的tau，MAP1B，β-tubulin参与条件性味觉厌恶。6、免疫印迹结果显示SPS大鼠海马神经元的tau，MAP1B，β-tubulin的异常表达参与调节SPS大鼠的条件性味觉厌恶记忆受损有关。
　　结论:1、SPS引发大鼠海马结构及功能的变化。2、SPS引起大鼠海马神经元中β-tubulin、tau、MAP1B、p-tau、Acetyl-α-tubulin及stathmin的异常表达。3、海马神经元的微管参与调节条件性味觉厌恶记忆。4、SPS大鼠海马神经元的微管蛋白及微管相关蛋白的异常表达与SPS大鼠的条件性味觉厌恶记忆受损密切相关。

目录

声明

摘要

英文缩略语

第一部分：微管蛋白及微管相关蛋白在PTSD大鼠海马神经元表达变化的研究

1 前言

2．材料与方法

2．1 实验动物

2．2 主要试剂与仪器

2．3 实验方法

3 结果

3．1 水迷宫游泳分析结果

3．2 SPS后大鼠海马组织内tau蛋白的水平变化

3．3 SPS后大鼠海马组织磷酸化tau(Ser202，Ser404)蛋白与tau蛋白的表达变化

3．4 SPS应激后大鼠海马组织中β-tubulin和MAP1B的表达变化

3．5 免疫荧光检测大鼠海马神经元β-tubulin的表达

3．6 免疫荧光检测大鼠海马组织中的MAP、TAU蛋白的表达

3．7 免疫荧光检测大鼠海马组织中Acetyl-α-tubulin的表达

3．8 检测大鼠海马组织中Stathmin的表达

3．9 电镜扫描大鼠海马神经元的微细结构

3．10 DAPI荧光检测细胞核

4 讨论

5 结论

第二部分：微管参与调控PTSD大鼠条件性味觉厌恶记忆的机制的研究

1 前言

2 材料和方法

2．1 实验材料

2．2 主要试剂与仪器

2．3 实验方法

3 实验结果

3．1 条件性味觉厌恶实验结果

3．2 海马神经元微管蛋白及微管相关蛋白的免疫印记结果

4 讨论

5 结论

本研究创新的自我评价

参考文献

综述 创伤后应激障碍与海马微管蛋白关系

攻读硕士学位期间取得的研究成果

致谢

个人简历