长链非编码RNA H19和HOTAIR在宫颈癌外周血中的表达及其临床意义

摘要

研究背景:宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，随着HPV病毒感染和宫颈细胞学这两个宫颈癌筛查的应用，增加了发现癌前病变并进行早期治疗的机会，并能够显著降低宫颈癌的发生率和死亡率。因此，宫颈癌早期诊断的检测非常重要。现已有不少研究证实在不同类型癌症患者的血清或血浆中可以检测到特异性的分子。其中部分研究表明使用循环生物标志物有助于对宫颈癌高风险患者的早期识别，但现在对宫颈癌循环标记物的认识还处于初级阶段。
　　长链非编码RNAs（long non-coding RNAs，LncRNAs）现已成为研究热点，其在肿瘤发生发展过程中发挥着重要作用。LncRNAs是长度超过200nt的一类RNA分子，由于其缺少开放阅读框架而不具有编码蛋白质潜能，所以最初被视作转录过程的“暗物质”而未受到重视。但近来有大量研究表明，LncRNAs参与机体各种调节过程如生长发育、细胞的增殖、分化和凋亡等，并与多种肿瘤、神经障碍性疾病、感染性疾病以及心脑血管疾病等密切相关。阅读相关文献发现有不少研究表明，一些LncRNAs可能在宫颈癌发病机理中起着重要作用例如H19、HOTAIR、SRA、LincRNA-p21、UCA1、MALAT-1、ANRIL、BCYRNI等。
　　已有研究表明从血浆中分离获得的外泌体中除有大量的miRNA外，还有一些LncRNAs（约占3.36％），这为外周血中存在LncRNAs提供了直接依据。一些LncRNAs可在某些肿瘤或心血管疾病患者血清（血浆）中稳定表达，并可作为循环诊断标志物，如宫颈癌的LncRNA-PVT1、乳腺癌的LncRNA-H19，结肠癌的LncRNA-HOTAIR，肝癌的LncRNA-HEIH，心肌梗死的LncRNA-LIPCAR。
　　目的:探讨长链非编码RNA H19和HOTAIR在宫颈癌外周血中的表达及其临床意义。
　　研究方法:1、收集2016年1-10月，52例宫颈癌术前以及39例因妇科良性疾病入院宫颈癌筛查正常患者外周血4ml。其中10例宫颈癌患者行术前、术后对比。所选病例均经病理诊断证实，术前均未行任何治疗。
　　2、对收集的血清标本进行Total RNA提取和纯化。实时荧光定量PCR检测LncRNAs的表达，并绘制扩增曲线以及溶解曲线，记录获得的各样本的CT值。
　　3、数据分析:
　　1) Excel表格分析目的基因的相对表达量。相对定量的计算公式为:foldinducation=2-△△Ct。fold inducation得出的结果是实验组目的基因的相对表达量。ΔΔCt=宫颈癌组（Ct目的基因-Ct内参基因）-对照组（Ct目的基因-Ct内参基因）
　　2)应用SPSS21.0软件分析实验数据，用非参数检验Mann-Whitney U分析宫颈癌患者和对照组血清样本LncRNA H19、HOTAIR表达水平差异，宫颈癌术前、术后H19和HOTAIR表达水平对比，并和宫颈癌患者临床病理资料进行相关性分析，根据血清LncRNA H19和HOTAIR表达水平绘制受试者工作曲线(receiveroperating characteristic curve，ROC)。以P＜0.05（双侧）为有统计学意义。
　　结果:1、血清样本实验组共抽提获得52个Total RNA样本，对照组共抽提获得39个Total RNA样本。2、所有样本进行实时定量RT-PCR，应用SPSS21.0软件进行数据分析数据分析，结果显示，血清LncRNA H19、HOTAIR在宫颈癌患者的表达水平显著高于对照组(P＜0.01)，血清H19、HOTAIR术后较术前表达水平显著降低(P＜0.05)。血清LncRNA H19和HOTAIR表达水平绘制ROC曲线，其曲线下面积(AUC)分别为0.661和0.707。
　　结论:宫颈癌患者和对照组血清中均可检出LncRNA H19和HOTAIR的表达，其在宫颈癌患者血清中表达水平明显高于对照组，宫颈癌患者术后血清H19和HOTAIR表达水平较术前显著下降。血清中H19、HOTAIR表达水平可能成为宫颈癌诊断和术后监测的循环肿瘤标志物。

目录

声明

摘要

英文缩略语

1 前言

2．1．1 主要设备及器材

2．1．2 主要试剂

2．1．3 引物

2．2 实验方法

2．2．1 研究对象

2．2．2 制备血清标本

2．2．3 血清RNA提取和荧光定量RT-PCR

2．2．4 统计分析

3 结果

4 讨论

5 结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 长链非编码RNAs在肿瘤组织及其外周血中的研究进展

在学期间科研成绩

致谢

个人简历