抗溴氰菊酯绿僵菌的诱变筛选及其杀虫效果

摘要

本实验以绿僵菌为材料,研究绿僵菌与溴氰菊酯、氟氯菊酯和阿维菌素这三种常用杀虫剂的配伍能力。在此基础上,选取溴氰菊酯作为实验底物对绿僵菌进行紫外、NTG和复合诱变筛选,获得一株对溴氰菊酯具有一定抗性的绿僵菌菌株,并采取SDS-PAGE凝胶电泳对突变绿僵菌进行分析,同时对突变菌株进行虫体实验来验证突变菌株的杀虫效果。结果表明:三种杀虫剂对绿僵菌生长都有一定的抑制作用。其中在致死剂量下阿维菌素的抑制效果最强、氟氯菊酯最弱、溴氰菊酯居中,同时三种杀虫剂对绿僵菌的抑制作用随着浓度的增加而增强,随着浓度的降低而减弱。通过实验确定复合诱变的最佳剂量,并在该条件下筛选出一株对敌杀死具有高抗性的绿僵菌菌株MA3。通过对该菌株进行SDS-PAGE凝胶电泳在蛋白水平上对突变菌株进行分析,观察到突变菌MA3蛋白谱带与对照蛋白谱带基本一致,但出现一条谱带变深,两条谱带变浅；表明MA3具有一定得遗传变异性。对MA3和出发菌进行虫体检测显示,单独使用MA3和出发菌的杀虫效果差别不大,但是当与敌杀死配合使用的时候能显著提高致死率并且缩短LT50的时间,说明突变菌MA3和敌杀死具有较好的配合效果。

目录

文摘

英文文摘

1 综述

1.1 绿僵菌的研究概况

1.1.1 绿僵菌分类方面的研究

1.1.2 绿僵菌的侵染机理及治病机制

1.2 绿僵菌诱变育种

1.2.1 微生物诱变育种概述

1.2.2 物理诱变剂的种类和作用机理

1.2.3 化学诱变剂的种类和诱变机理

1.3 利用绿僵菌防治常见害虫的研究

1.3.1 绿僵菌菌剂剂型的确定

1.3.2 室内的毒力测定

1.3.3 绿僵菌生物防治在国外的应用情况

1.3.4 绿僵菌油剂在我国国内的研究现状

1.4.目前存在的问题和展望

1.5 本实验的目的及意义

2 几种常用微生物培养基对绿僵菌生长的影响

2.1 材料和方法

2.1.1 实验材料

2.1.2 实验方法

2.2 结果分析

2.3 小结

3 绿僵菌与三种常用农药的相容性实验

3.1 材料和方法

3.1.1 实验材料

3.1.2 实验方法

3.2 结果与分析

3.3 小结

4 抗溴氰菊酯绿僵菌的诱变筛选

4.1 材料和方法

4.1.1 实验材料

4.1.2 实验方法

4.2 实验结果

4.2.1 化学诱变浓度、时间的确定及突变株的初筛

4.2.2 紫外诱变时间的确定及突变株的初筛

4.2.3 复合诱变条件的确定

4.2.4 抗溴氰菊酯菌株的筛选

4.3 小结

4.3.1 复合诱变具有高效性

4.3.2 微生物筛选技术的改进。

5 菌体蛋白的SDS-PAGE凝胶电泳检测菌株的突变性和遗传稳定性

5.1 材料和方法

5.1.1 材料

5.1.2 方法

5.2 结果分析

5.2.1 菌体蛋白SDS-PAGE凝胶电泳对突变菌株的鉴定

5.2.2 菌体蛋白SDS-PAGE凝胶电泳对突变菌株遗传稳定性的鉴定

5.3 小结

5.3.1 蛋白谱带分析

5.3.2 稳定性

6 绿僵菌与杀虫剂的联合毒力测定

6.1 材料与方法

6.1.1 供试菌种及杀虫剂

6.1.2 不同浓度杀虫剂的配制

6.1.3 绿僵菌孢子悬浮液的配制和孢子粉的制备

6.1.4 供试黄粉虫的采集

6.1.5 黄粉虫对敌杀死敏感性的观察

6.1.6 实验的设置

6.1.7 数据的统计分析

6.2 实验结果

6.2.1 黄粉虫对敌杀死敏感性的观察

6.2.2 绿僵菌与敌杀死混合溶液对黄粉虫的作用效果

结论

参考文献

攻读硕士学位期间发表学术论文情况

致谢