C型凝集素基因在仿刺参不同部位的表达模式及抗菌功能的初步分析

摘要

C型凝集素(CTLs)在仿刺参的非特异性免疫应答过程中起重要的调节作用。当仿刺参机体受到外来病原攻击时，C型凝集素将起到很好的免疫防御作用。
　　 本论文首次采用基因克隆技术(RACE技术)获得了仿刺参C型凝集素基因(AJCTL)的cDNA全长序列，并对其进行了生物信息学分析；采用原位杂交技术(ISH)探究了AJCTL基因在仿刺参体内的表达部位；利用实时荧光定量PCR技术(realtime-PCR)研究了AJCTL基因在革兰氏阴性、阳性菌的刺激下在仿刺参体内不同部位中的表达模式。
　　 实验结果显示：1、仿刺参C型凝集素的基因cDNA全长为710bp，将此基因命名为AJCTL。其中开放阅读框为618bp，编码205个氨基酸残基，N末端带有一个信号肽，C末端带有一个CTLD结构域。经过计算，此蛋白分子量为22.5kD，等电点为5.59。根据此蛋白的特点，AJCTL蛋白属于reg蛋白第七组Ca2+依赖型糖结合蛋白，特异性识别甘露糖配体。2、原位杂交结果显示，AJCTL在仿刺参的体壁、纵肌、肠壁和呼吸树等组织均有分布，在肠壁组织中信号尤为强烈。实时荧光定量PCR实验结果也显示AJCTL蛋白在成年仿刺参体内主要分布在纵肌和肠壁当中，在呼吸树和体壁内的表达相对较少。3、C型凝集素基因对与革兰氏阴性菌和阳性菌均有应答。并且利用鳗弧菌刺激12小时后，随着菌液浓度的提升，AJCTL的表达量也逐步提高，以上结果可以初步说明AJCTL参与了仿刺参的先天免疫应答，对仿刺参机体起到重要的免疫防御作用。
　　 仿刺参因其营养丰富、经济价值较高，深受人民喜爱。但是由于各种疾病的入侵影响了仿刺参的产量。如今人们的研究多是集中于仿刺参养殖等方面。少有人对仿刺参基因和蛋白的表达模式及功能进行研究，但是对于高等无脊椎动物，非特异性免疫是其重要的生理屏障。因此关于仿刺参体内C型凝集素的研究将有助于更好的了解C型凝集素超家族结构及其功能，此外对于经济渔业品种仿刺参病害的预防也起到了一定的指导作用。