七鳃鳗免疫相关基因的表达模式分析及水通道蛋白3的克隆与生物特性分析

摘要

七鳃鳗现存的圆口纲无颌类脊椎动物的代表，已是研究脊椎动物适应性免疫系统起源和进化的新型模式生物。TLR/MyD88信号通路在固有免疫系统中占据着重要的位置，通过MyD88与IRAK1、TRAF6、IKKβ、TRAF3等一些基因的相互作用，来参与免疫应答。我们首次从白细胞cDNA文库中搜索到4个基因(IRAK1、TRAF6、IKKβ、TRAF3)的EST序列，研究了TLR/MyD88信号通路重要成员在七鳃鳗体内的表达模式。脂多糖(LPS)刺激后，发现IRAK1、TRAF6、IKKβ3个基因在鳃中表达上调，而IRAK1、TRAF6、TRAF33个基因在心脏中表达升高，为后续克隆基因全长以及其功能的研究提供线索。
　　本研究利用人基因芯片杂交分析LPS刺激前后七鳃鳗白细胞中基因的差异表达。结果显示有差异表达基因155条，包括92条上调基因，63条下调基因，涉及信号转导、细胞的生长分化、代谢、免疫防卫、细胞凋亡与增殖等许多方面。本文中的这些结果为探索无颌类动物免疫应答机制提供新的有价值线索。从基因芯片实验结果中筛选免疫前后表达量上调的水通道蛋白3基因Aqp3做深入研究。AQP3是水甘油通道蛋白家族成员，有助于水、尿素与甘油的转运，并促进细胞的增殖与迁移。在本研究中，从七鳃鳗中克隆得到了Aqp3(LjAqp3) cDNA（GenBank序列号KR054618），LjAQP3的ORF区为900 bp，编码299个氨基酸，含6个跨膜结构域和1个信号锚定肽。LjAQP3有2个非常保守的NPA（天冬酰胺-脯氨酸-丙氨酸）模体与1个ar/R（芳香族/精氨酸）结构。与其他物种进行序列分析，表明同源性较高。q-PCR分析表明，LjAqp3在七鳃鳗的多种组织器官中表达。脂多糖刺激后，LjAqp3在鳃、肠中的表达量升高比较明显。

目录

声明

缩略语表

第1章 引 言

1.1 日本七鳃鳗

1.2 七鳃鳗免疫细胞和免疫器官

1.3 七鳃鳗的免疫相关基因研究概况

1.4 水通道蛋白

1.5 本研究的目的和意义

第2章 TLR/MyD88信号通路中重要成员在七鳃鳗中的表达模式

2.1 材料

2.2 方法

2.3 实验结果

2.4 讨论

第3章 脂多糖刺激前后七鳃鳗白细胞的基因表达差异

3.1 材料

3.2 方法

3.3 实验结果

3.4 讨论

第4章 LjAqp3基因的分子克隆、表达及生物学特性分析

4.1 材料

4.2 方法

4.3 实验结果

4.4 讨论

第5章 结 论

本 文 创 新 点

参考文献

附录A 柱式DNA胶回收流程图

附录B 不同物种AQP3的氨基酸序列（NCBI）

攻读硕士学位期间发表学术论文情况

致谢