乌苏里藜芦碱预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤保护作用的研究

摘要

目的：肝脏缺血再灌注损伤(HepaticIschemiaReperfusionInjury，HIRI)是临床常见的病理生理过程，常见于肝切除术、出血性休克、肝移植等，为手术失败和导致患者死亡的原因之一。乌苏里藜芦生物碱(VeratrumnigrumL.Var.ussurienceNakaialkaloids，VnA)是百合科藜芦属植物乌苏里藜芦(VeratrumnigrumL.Var.ussurienceNakai)根中提取的总生物碱。研究已证实VnA具有降压及显著的抗栓降黏作用。本实验室曾在前期的研究中发现其对肠缺血再灌注损伤具有一定的保护作用，本课题旨在研究其对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用，并对其可能的作用机制进行初步探讨。 方法：将50只健康雄性Wistar大鼠随机分为5组：(1)假手术组(阴性对照组)；(2)肝脏缺血再灌注组(模型组)；(3)低剂量VnA预处理组(10μg/kg)；(4)高剂量VnA预处理组(20μg/kg)；(5)丹参(SMI)预处理组(阳性对照组)。于缺血前30min，VnA预处理组腹腔注射乌苏里藜芦碱注射液，模型组和假手术组腹腔注射等量的0.9﹪生理盐水，丹参预处理组连续三次(分别于术前48h、24h和1h)腹腔注射SMI注射液(2g/kg)。采用Yoshizumi法建立肝脏缺血再灌注损伤模型，假手术组仅行剖腹术及肝左、中叶肝蒂分离术，并不夹闭。夹闭90min后，去除血管夹再灌注4h，各组取血及肝、肺组织。光镜下观察病理石蜡切片肝、肺组织形态学改变，测定肝功和肺组织含水率，测定肝、肺组织中超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)活力、丙二醛(maleicdialdehyde，MDA)和一氧化氮(nitricoxide，NO)含量及髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)活力，通过免疫组化和Western-blotting检测细胞间黏附分子(intercellularadhesionmolecule-1，ICAM-1)和E-选择素(E-selectin，ES)的表达情况。 结果：1.与假手术组相比，I/R组：(1)组织形态学见肝、肺组织有明显的病理损伤，表现为肝、肺组织水肿、出血和炎性粒细胞浸润。(2)肝功血清酶学检测：ALT和LDH均显著升高(p＜0.01)；肺组织含水率也明显升高(p＜0.01)，提示肝脏功能严重受损，肺组织明显水肿。(3)肝组织MPO、NO水平显著升高(p＜0.01)，而SOD水平明显降低(p＜0.01)；肺组织MPO、NO、MDA水平显著升高(p＜0.01)，而肺组织SOD活力明显降低(p＜0.01)，表明肝脏缺血再灌注诱发肝、肺组织脂质过氧化损伤，氧自由基清除能力下降，白细胞浸润增多。(4)免疫组织化学和Western-blotting检测肝、肺组织ICAM-1和E-selectin表达均显著增强。 2.采用VnA预处理后，与I/R组相比，不同剂量VnA预处理组：(1)组织形态学见肝、肺损伤程度明显减轻。(2)肝功能改善，表现为血清ALT及LDH水平显著降低(p＜0.01)；肺水肿程度减轻，表现为肺组织含水率降低(p＜0.01)。(3)肝、肺组织过氧化损伤及白细胞浸润减轻，自由基清除能力增强，表现为肝脏MPO及NO含量减少(p＜0.01，p＜0.01；p=0.01，p＜0.01)及SOD活力增强(p=0.05，p＜0.05)；肺组织MDA、MPO及NO含量减少(p＜0.01，p＜0.01；p＜0.01，p＜0.01；p=0.01，p＜0.01)，SOD活力增强(p＜0.01)，且表现出剂量依赖性。(4)肝、肺组织中ICAM-1和E-selectin表达减弱。 结论：肝脏缺90分钟再灌注4小时可引起明显的肝、肺损伤，采用VnA预处理，可有效降低肝、肺损伤的程度；提高SOD活力，降低MDA含量，增强自由基清除能力，减轻由于缺血再灌注引起的脂质过氧化损伤；减弱NO过量引起的细胞毒性作用；减少白细胞在炎症和组织损伤区域的聚集、滚动和黏附；改善缺血再灌注损伤的原发器官和远隔器官的功能状态，对肝脏缺血再灌注损伤具有明显的保护作用，且在10～20μg/kg范围内呈现剂量依赖性。

目录

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摘要

前言

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

附图

综述肝脏缺血再灌注损伤的研究进展

致谢

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