KAI1复制缺陷型腺病毒载体的构建及其抗胰腺癌转移机制的初步探讨

摘要

本文应用Ad-EasyTM系统与KAI1基因在大肠杆菌中同源重组的方法，构建Ad-KAI1腺病毒载体，酶切鉴定正确后以脂质体转染的方式在293细胞中包装，PCR、Westernblot鉴定后扩增、病毒纯化柱纯化，测定病毒滴度后选择最适感染强度感染人胰腺癌细胞PANCI，检测到感染Ad-KAI1后高转移的PANCI细胞中KAI1的多量表达，即获得了携带人肿瘤转移抑制基因KAI1复制缺陷型腺病毒载体。应用构建的KAI1腺病毒表达载体将KAI1基因高效导入胰腺癌细胞，通过体外迁移实验检测到即使在HGF存在下KAI1仍具有较强的抗侵袭能力，进而通过细胞免疫化学的方法证实了胰腺癌细胞系PANCI有c-Met蛋白表达，并用免疫共沉淀检测KAI1与c-Met的相互作用以及[γ-32P]ATP掺入免疫印迹的方法分析SPK活性的改变，初步探讨KAI1抗胰腺癌移信号机制。

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摘要

第一部分 KAI1复制缺陷型腺病毒载体构建

第二部分:腺病毒介导的KAI1基因在抗胰腺癌转移信号通路中的初步探讨

第三部分 讨论

结论

致谢

参考文献

附录:胰腺癌的基因治疗