转染RI基因对卵巢癌细胞HO-8910体外增殖抑制作用的实验研究

摘要

核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)是一种酸性糖蛋白，分子量50KDa，能与RNaseA紧密结合抑制其对RNA的水解作用。血管生成因子(Ang)是肿瘤细胞和正常细胞分泌的具有强烈诱发血管生成活性的一种单链碱性蛋白质，分子量 14.4KDa，是RNaseA超家族中的一员。Ang在组织细胞中分布广泛，在肿瘤组织及正常组织中均有表达，提示其在体内受到严格的调控。Ang的氨基酸残基与RNaseA具有35﹪的同源性，X射线分析表明它们有着及其相似的空间结构，都可以作为配体与RI紧密结合，但Ang与RI有更大的亲和力。被结合后的Ang便失去了促血管生成的活性，试验也证实RI能有效的阻断血管生成因子诱导的血管生成，从而减缓肿瘤的生长和转移，达到治疗肿瘤的目的。 卵巢癌是一种实体肿瘤，在肿瘤间质中存在着高密度的微血管，卵巢癌的生长转移与这些微血管相关。在恶性肿瘤细胞生长的初始阶段，没有自身的血管系统，局部营养主要靠效率很低的单纯扩散方式提供，不会发生转移。当肿瘤体积超过1～2mm<'3>就需要新生血管维持营养和氧气供给从而迅速生长并可发生转移。肿瘤的新生毛细血管密度越高越有利于肿瘤的生长和转移，因此在恶性肿瘤发生时血管生成活跃，研究控制卵巢癌血管生成的方法对治疗卵巢癌意义重大。 目前，虽然血管生成抑制剂治疗卵巢癌已获得肯定，但认为应用转基因疗法将特定基因转入肿瘤细胞，使之持续表达从而达到持续抑制肿瘤血管生成的作用效果更显著。基因治疗在肿瘤领域的成功应用为卵巢癌的基因治疗奠定了基础，为治疗卵巢癌展现了一个有希望的前景。 目的：利用逆转录病毒载体通过脂质体介导的方法将RI基因转染卵巢癌细胞HO-8910，探讨RI基因对该肿瘤细胞增殖的抑制作用。 方法： 1.将重组载体(plncx-RI)通过脂质体介导的方法转染HO-8910细胞。 2.用G418筛选获得稳定转染的细胞阳性克隆。 3.用RT-PCR的方法鉴定细胞中的RI基因，用免疫细胞化学的方法检测细胞中RI的表达。 4.通过细胞形态学观察，细胞计数，MTT及流式细胞仪细胞周期分析研究转染RI基因对卵巢癌细胞HO-8910增殖的抑制作用。 结果： 1.用Lipofectamine 2000转染HO-8910后用400ug/ml的G418筛选出阳性克隆。 2.经RT-PCR鉴定RI基因已经整合进HO-8910细胞基因组中。 3.通过免疫细胞化学检测出在转染后的细胞RI基因在胞浆内有高表达。 4.HO-plncx-RI组与HO-plncx组及未转染组相比细胞生长减慢。转染后的细胞生长抑制率24h，48h，72h，96h明显比转空质粒组高，P<0.05。转染组G<,1>期细胞增多(69.06﹪比38.07﹪，P<0.05)，S期细胞显著减少(50.28﹪比24.97﹪，P<0.05)。 结论：转染RI基因对卵巢癌HO-8910细胞的增殖具有抑制作用

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综述 血管生成抑制因子与卵巢癌的基因治疗

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