5-HT及其5-HT2A受体在大鼠丘脑前核的表达

摘要

目的：本实验通过观察5-羟色胺(5-HT)及其5-羟色胺2A受体(5-HT2AR)在Sprague-Dawley(SD)大鼠丘脑前核的表达情况，探讨5-HT及5-HT2AR与学习记忆的关系，从蛋白水平为两者参与学习记忆提供形态学依据。
　　 方法：实验动物SD成年大鼠16只（光镜组10只，电镜组6只），雄性，体重200-250g。由大连医科大学实验动物中心提供，4％水合氯醛腹腔麻醉（1ml/100g体重），开胸暴露心脏，直视下将灌注针经左心室插至升主动脉。剪开右心耳，快速灌注生理盐水200ml直至右心耳流出液无色透明，再灌注固定液4%多聚甲醛(pH7.4)300ml（电镜标本用4%多聚甲醛-0.5%戊二醛混合液300ml），前100ml快速灌注，后200ml缓慢灌注，持续灌注约2h。灌毕立即取脑，剔除脑表面的脑膜，并置于上述新鲜固定液中4℃后固定过夜，最后在振动切片机上连续冠状切片，片厚30μm（电镜标本50μm）。切取3套，一套用于5-HT，一套用于5-HT2AR，一套做对照实验。漂浮法免疫组织化学ABC法观察5-HT及5-HT2AR在丘脑前核内的表达情况，包埋前免疫电镜技术观察丘脑前核群的5-HT能神经纤维终末。应用图像分析系统测量5-HT免疫组化阳性反应产物的平均光密度值(A)，5-HT2AR免疫组化阳性神经元的平均灰度值，所有数据应用SPSS11.5软件进行配对资料t检验。
　　 结果：1.5-HT免疫组化结果：光镜下，大鼠丘脑前核群的前、中、后部内均可见大量棕黄色的免疫反应阳性的5-HT能神经纤维终末，高倍镜下可见纤维终末走行距离较长，呈串珠状。其中背侧核(anterodorsal nucleus，AD)标记神经元着色较深，纤维密集，而腹侧核(anterovental nucleus,AV)标记神经元着色较浅，纤维稀疏。AD内的5-HT免疫反应阳性产物平均光密度值(A)与AV的5-HT免疫反应阳性产物平均光密度值比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。阴性对照未见阳性表达。
　　 电镜下，可见免疫反应阳性5-HT能神经轴突终末，终术直径约（0.89±0.41）μm，(n=131)，终末多为圆形或卵圆形，内含圆形突触小泡和线粒体。它们作为突触前成分主要形成非对称性轴-树突触。
　　 2.5-HT2AR免疫组化结果：在丘脑前核AD、AV内可见黄色的5-HT2AR免疫反应阳性神经元，其中AD的神经元胞体较大，着色较深，免疫反应阳性产物平均灰度值与AV的免疫反应阳性产物平均灰度值比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。免疫反应阳性产物主要定位于神经元胞膜，胞质和胞核不着色。阴性对照未见阳性表达。
　　 结论：
　　 1．大鼠丘脑前核内存在大量5-HT能神经纤维终末，在AD、AV的表达有差异。
　　 2.5-HT2AR在大鼠丘脑前核内表达，在AD、AV表达有差异。