乳酸杆菌对5-Fu腹腔注射致肠屏障功能障碍的保护作用

摘要

目的：1、观察5-Fu腹腔注射对SD大鼠小肠结构及肠屏障功能的影响，比较一次性给药和分次连续给药方案对小肠粘膜的损伤作用；
　　 2、探讨乳酸杆菌对5-Fu引起的大鼠肠屏障功能损伤的保护作用及机制。
　　 方法：
　　 SD大鼠48只随机分为6组，每组8只。对照组(A)、小剂量5-Fu组(B)、小剂量5-Fu联合乳酸杆菌组(C);对照组(D)、大剂量5-Fu组(E)、大剂量5-Fu联合乳酸杆菌组(F)。B组、C组每天腹腔注射5-Fu50mg/kg D1-5天，A组注射等比例生理盐水；C组每天予乳酸杆菌溶解液1ml灌胃(含乳酸杆菌1×109cfu/ml)D1-7天，A组、B组等容积生理盐水灌胃。E组、F组腹腔注射5-Fu250mg/kg D1天，D组注射等容积生理盐水；F组每天予乳酸杆菌溶解液1ml灌胃(含乳酸杆菌1×109cfu/ml)D1-7天，D组、E组等容积生理盐水灌胃。实验中观察动物体重变化并对腹泻情况进行评分。于实验第8天处死每组动物，活体取小肠组织观察肠粘膜病理学变化和超微结构，腹主动脉取血测定血浆内毒素，采用免疫组化方法测定小肠粘膜NF-κB表达，BCA法测定小肠黏膜蛋白质含量。
　　 结果：
　　 1、各实验组大鼠体重变化
　　 实验过程中对照组A对照组D体重进行性增加，增加量差别无统计学意义。B组、C组及E组各有一只大鼠与实验中死亡。实验后第8天B组、C组、E组、F组体重明显下降，与对照组有显著性差异P＜0.05。组间比较，F组体重下降小于另外三组，差异有统计学意义P＜0.05。
　　 2、各实验组大鼠腹泻情况
　　 实验72小时，E组腹泻程度最严重，C组好于B组，F组好于E组，B组好于E组，差异有统计学意义，P＜0.01；F组C组之间无差别。实验第8天，B组腹泻程度最严重，C组好于B组，F组好于E组，E组好于B组，F组好于C组，差异有统计学意义，P＜0.01。
　　 3、血浆内毒素水平测定
　　 实验第8天，两对照组间内毒素比较，D组、A组差异无统计学意义；B、C与E、F组血浆内毒素均明显升高，其中B组＞C组，E组＞F组，各组间比较差异有显著统计学意义(P＜0.01)；小剂量5-Fu连续注射组血浆内毒素水平均高于大剂量5-Fu一次性注射组，两组间比较差异有显著统计学意义(P＜0.01)；未予乳酸杆菌灌胃组血浆内毒素水平均高于乳酸杆菌灌胃组，两组间比较差异有统计学意义(P＜0.01)。
　　 4、各实验组大鼠病理评分
　　 实验第8天，B组病理评分最差，C组好于B组，F组好于E组，E组好于B组，F组好于C组，差异有统计学意义，P＜0.01。
　　 5、小肠黏膜超微结构观察
　　 实验第8天，对照组超微结构正常。B组、C组、E组、F组有不同程度超微结构改变。体现在小肠细胞微绒毛、细胞间紧密连接及细胞间隙的改变。F组好于E组，两组好于C组。B组变化最重。
　　 6、各实验组大鼠肠黏膜NF-κB表达情况
　　 实验第8天，B、C与E、F组NF-κB的表达及含量均高于A、D组，其中E组高于F组，B组高于E组，C组高于F组，差异有统计学意义，P＜0.05;B组高于C组，但差异没有统计学意义，P＞0.05。
　　 7、小肠黏膜蛋白质含量
　　 实验第8天，A组的肠黏膜蛋白质含量＞D组，但差异无统计学意义;B、C与E、F组均低于A、D组;C组＞B组，F组＞E组，除F组外，其余3组与各自对照组比较差异有统计学意义，P＜0.05;F组与D组比较，差异无统计学意义；B、C组均低于于E、F组，P＜0.05;B、E组均低于于C、F组，P＜0.01。
　　 结论：
　　 1、通过腹腔注射5-Fu造成大鼠肠黏膜屏障功能受损，这一过程与NF-κB被激活产生炎症反应，细胞间紧密连接完整性破坏，肠黏膜蛋白质丢失，结果造成内毒素血症有关。
　　 2、比起大剂量给药的瞬间激活，肠黏膜上皮细胞中NF-κB被小剂量5-Fu给药持续激活所表达的炎症反应更为严重。可能持续激活在体内起到扩增炎症的作用。
　　 3、乳酸杆菌对大鼠5-Fu腹腔注射引起的肠黏膜屏障功能受损有一定的防治作用。
　　 4、乳酸杆菌是通过下调NF-κB表达及减轻肠黏膜蛋白质含量损失，保护紧密连接完整性而发挥治疗作用的。