芍药甙调节Oddi括约肌肌细胞运动及钾离子通道机制的研究

摘要

背景:Oddi括约肌(sphincter of Oddi,SO)位于胆管、胰管和十二指肠结合部,是胆汁和胰液的最终流出道。由胆总管括约肌、壶腹部括约肌、胰管括约肌和纵肌束组成。Oddi括约肌运动是一个动态的周期性变化过程并于十二指肠移动性运动复合波密切相关。具有将胆汁胰液排入十二指肠、防止十二指肠内容物返流至胆管和胰管内以及充盈胆囊的作用。因此Oddi括约肌的运动功能是胆道系统动力学研究的重要内容。Oddi括约肌运动功能障碍(sphincter of Oddi dysfunction,SOD)是临床常见疾病之一,较难诊断和治疗。分为Oddi括约肌功能紊乱和Oddi括约肌狭窄两大类。Oddi括约肌功能紊乱主要是因为SO的持续痉挛造成的。严重的影响了人们的生活质量,目前尚无完全有效治疗方法。
　　 目前国内外的文献就胃肠平滑肌运动机制的研究比较多,关于SO的运动机制及其中药的作用研究甚少。已有文献报道证实芍药甙对可以通过多种途径对胃肠平滑肌进行调解1,Oddi括约肌同属消化道平滑肌,芍药甙是否具有相同或是相似的调节途径对Oddi括约肌平滑肌进行调节。我们已经开展了对芍药甙对Oddi括约肌肌环运动的研究,并取得了一定的进展。结果显示芍药甙能够明显的抑制钾通道阻滞剂对家兔离体Oddi括约肌肌环的收缩作用,为了深入研究芍药甙的作用机理,我们提取单个Oddi括约肌肌细胞,直接观察芍药甙对平滑肌细胞的收缩和舒张活动的调节作用,以及钾离子通道的作用机制。从而在细胞水平上进一步阐明芍药甙对家兔Oddi括约肌运动调节的机制和途径。
　　 目的:探讨电压依赖性钾通道(Kv)、ATP敏感性钾通道(KATP)以及大电导钙激活钾通道(Bkca)对家兔Oddi括约肌平滑肌细胞的作用;探讨芍药甙对家兔Oddi括约肌细胞的调控作用。
　　 方法:1.取纯种新西兰兔SO段,用Ⅱ型胶原酶消化获得单个平滑肌细胞,进行原代培养,免疫组织化学方法鉴定;并通过图像分析系统测定静息状态细胞长度。
　　 2.观察Kv通道阻断剂4-aminopyridine(4-AP),KATP阻断剂Glib,Bkca通道阻断剂Iberiotoxin(IBTX),对家兔Oddi括约肌平滑肌细胞的作用;观察芍药甙对电压依赖性钾通道(Kv)和大电导钙激活钾通道(Bkca)阻断剂收缩作用的影响。
　　 结果:1.家兔SO平滑肌细胞平均长度为(143.7±12.3)μm;
　　 2.Kv通道阻断剂4-AP可以引起家兔Oddi括约肌平滑肌细胞收缩;并且随4-AP浓度增加,收缩程度增强;
　　 3.Bkca通道阻断剂IBTX能够轻度引起家兔Oddi括约肌平滑肌细胞收缩;
　　 4.KATP阻断剂Glib引起家兔Oddi括约肌肌细胞收缩未见统计学意义;
　　 5.4-AP对兔胆道口平滑肌细胞的收缩作用能够被芍药甙抑制,并随浓度增加,抑制作用增强;
　　 6.IBTX对兔胆道口平滑肌细胞的收缩作用能够被芍药甙抑制,并随浓度增加,抑制作用增强;
　　 结论:1.Oddi括约肌平滑肌细胞是贴壁细胞,呈梭形外观。
　　 2.Kv通道、Bkca通道和KATP通道存在于家兔Oddi括约肌平滑肌细胞细胞膜表面。Kv通道和Bkca通道在维持Oddi括约肌细胞的静息电位起主要作用。
　　 3.芍药甙可能通过对Kv通道和Bkca通道的调控,细胞膜静息电位的改变,实现对平滑肌的舒张效应。