ERK1/2信号通路的变化对小胶质细胞功能及其膜表面TNFR表达的影响

摘要

目的:
　　 观察ERK1/2信号通路的变化对小胶质细胞功能及其膜表面TNFR表达的影响。
　　 方法:
　　 以BV2细胞株（小鼠小胶质细胞瘤细胞）和PC12细胞株（大鼠嗜铬细胞瘤细胞）为研究对象，分别用其代表小胶质细胞和神经元。在不同程度低氧刺激及有无ERK1/2通路阻断剂(PD98059)存在的条件下培养BV2细胞，再用其培养液培养PC12细胞，采用CCK-8法测定PC12细胞存活率，以此来反映不同情况下BV2细胞的功能。应用Westernblot法检测不同程度缺氧刺激下及加入ERK1/2通路阻断剂前后BV2细胞中JNK、p38MAPK蛋白表达及磷酸化水平和膜表面TNFR的表达情况。同时，应用ELISA法检测不同状态下BV2细胞分泌表达TNF-α、IL-1β、NGF的情况。
　　 结果:
　　 1.正常对照组PC12细胞存活率为100％，低氧1h组、低氧12h组PC12细胞存活率分别为85.14％，40.97％;分别加入ERK1/2通路阻断剂PD98059则PC12细胞存活率明显下降，分别为52.48％、27.10％(p＜0.05)。
　　 2.蛋白表达量用灰度值表示（灰度值与蛋白表达量成正比）。低氧培养1hBV2细胞内p-JNK、p-p38MAPK及膜上TNFR1、TNFR2的灰度值分别是:0.0451±0.010、0.0549±0.015、0.0394±0.019、0.1281±0.002;加入PD98059后其值分别为:0.1023±0.013、0.0815±0.012、0.0592±0.004、0.0533±0.001;低氧培养12hBV2细胞内p-JNK、p-p38MAPK及膜上TNFR1、TNFR2的灰度值分别是:0.2866±0.013、0.1001±0.004、0.1261±0.018、0.0241±0.002，加入PD98059后其值分别为:0.3845±0.017、0.1436±0.010、0.2882±0.016、0.0175±0.003。表明阻断ERK1/2通路后，小胶质细胞内p-JNK、p-p38MAPK及膜TNFR1表达量显著增多，膜TNFR2表达明显减少(p＜0.05)。
　　 3.低氧刺激时BV2细胞可分泌TNF-α、IL-1β和NGF。低氧培养1hTNF-α、IL-1β及NGF分别为808.97±1.35pg/ml、8.17±0.06pg/ml、209.53±2.74pg/ml，加入PD98059后分别为:1652.07±21.51、32.79±1.62、138.47±1.9;低氧培养12hTNF-α、IL-1β及NGF分别为1652.07±21.51pg/ml、32.79±1.62pg/ml、138.47±1.91pg/ml，加入PD98059后分别为:1864.12±17.33、56.33±1.12、82.15±0.87。表明阻断ERK1/2通路后，TNF-α和IL-1β的分泌量明显增加，而NGF的水平显著下降(p＜0.05)。
　　 结论:
　　 1.ERK1/2信号通路在低氧条件下参与了小胶质细胞的保护作用。
　　 2.低氧条件下，ERK1/2信号通路的变化会影响BV2细胞内JNK、p38MAPK磷酸化水平。
　　 3.ERK1/2信号通路参与调控小胶质细胞膜上TNFR及TNF-α、IL-1β、NGF的分泌表达。

目录

声明

摘要

前言

材料和方法

一．细胞株及来源

二．实验试剂

三．实验仪器

四．细胞培养

五．细胞存活率测定

六、小胶质细胞功能的评价

七．ERK1／2信号通路的阻断剂最佳阻断浓度的确立，ERK1／2通路的变化对磷酸化JNK、p38MAPK及其膜表面TNFR表达的影响

八．小胶质细胞在不同培养状态下分泌TNF-α、IL-1β、NGF情况

九．统计学分析

结果

一．细胞密度与吸光度值方程的建立及阻断剂PD98059最佳阻断浓度的确立

二、ERK1／2通路阻断前后，小胶质细胞不同培养状态下p-p38MAPK、p-JNK及其膜表面TNFR的表达情况

三、ERK1／2通路阻断前后，低氧培养条件下小胶质细胞功能的变化

四．ERK1／2通路阻断前后，小胶质细胞不同功能下分泌TNF-α、IL-1β、NGF的情况

讨论

一、ERK1／2信号通路的变化对小胶质细胞功能的影响

二、低氧刺激下ERK1／2信号通路与JNK、p38MAPK通路的关系

二、ERK1／2信号转导通路变化对小胶质细胞膜表面TNFR表达的影响

三、ERK1／2信号转导通路变化对小胶质细胞分泌TNF-α、IL-1β、NGF的影响

结论

参考文献

综述

致谢