抗氧化剂对阿尔茨海默病的神经保护作用及其机制的研究

摘要

第一部分:抗氧化剂普罗布考治疗阿尔茨海默病的临床研究
　　目的:比较普罗布考联合多奈哌齐与单用多奈哌齐治疗阿尔茨海默病的疗效。
　　方法:收集40例阿尔茨海默病患者以单盲对照法，随机分为联合用药治疗组与单药治疗组，随访时间窗达8周，在治疗前及治疗第8周末采用简易智能精神状态量表(MMSE)测定认知功能，评定临床疗效。
　　结果:治疗8周末MMSE评分:联合用药治疗组与治疗前比较，差异有统计学意义(P＜0.01);单药治疗组与治疗前比较，差异无统计学意义(P＞0.05);治疗8周末两组比较，差异无统计学意义(P＜0.05)。
　　结论:普罗布考联合多奈哌齐能更好地改善阿尔茨海默病的认知功能。
　　第二部分:木犀草素对阿尔茨海默病体外模型的神经保护作用及其机制的研究
　　目的:探讨木犀草素(Luteolin)对以Aβ25-35诱导人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y细胞）创建的阿尔茨海默体外模型氧化损伤的神经保护机制。
　　方法:以50μmol/L浓度Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞，建立阿尔茨海默体外模型。以不同浓度剂量的木犀草素分别对AD体外模型进行干预。实验分组:
　　1.正常对照组:正常培养的SH-SY5Y细胞;
　　2.AD体外模型组:50μmol/L的Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞;
　　3.治疗1组:1μmol/L的木犀草素干预AD体外模型组;
　　4.治疗2组:5μmol/L的木犀草素干预AD体外模型组;
　　5.治疗3组:10μmol/L的木犀草素干预AD体外模型组;
　　6.治疗4组:20μmol/L的木犀草素干预AD体外模型组;
　　实验采用倒置显微镜观察细胞形态学变化及透射电镜观察细胞超微结构改变;MTT法检测各组细胞存活率;酶标仪法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;通过测定丙二醛(MDA)含量、总谷胱甘肽(GSH)含量以及测定超氧化物歧化酶(SOD)活力来评估细胞氧化损伤程度。
　　结果:
　　（一）形态学观察
　　1.正常对照组:光镜下细胞数量多，突触明显，细胞呈现多边形，生长状态良好，细胞的折光性正常。电镜下细胞核圆，细胞核仁大，细胞器清晰可见，细胞器的数量，正常结构。
　　2.AD体外模型组:光镜下细胞数量明显减少，细胞结构消失，细胞呈多边形或不规则形，生长状态差，细胞折光性明显变差。电镜下细胞核呈现不规则形状，核仁呈边向分布，细胞器数量明显减少，整体结构杂乱。
　　3.治疗1-3组:光镜下随着药物浓度的递增，细胞数量均明显增多，个体逐步饱满，折光性明显改善，生长状态逐步好转。电镜下，细胞内部结构状态逐步向正常细胞对照组接近，细胞核逐渐变圆，质内细胞器增多，结构逐步向正常细胞接近。
　　4.治疗4组:光镜下极少见明确细胞结构，细胞破碎，生长状态及折光性均极差，细胞损害程度相当严重，形态学改变十分明显。电镜下仅存的细胞结构不明显，核膜皱缩，细胞器少而结构破坏严重，较少见完整细胞器，整体结构杂乱难以分辨。
　　（二）神经保护作用的评估
　　1.与正常对照组相比较，AD体外模型组的MTT吸光度OD值与细胞存活率均明显下降(P＜0.01)，LDH活性及细胞凋亡率明显抬高(P＜0.01)。
　　2.与AD体外模型组比较，治疗1-3组的MTT吸光度OD值增加(P＜0.05)，细胞存活率明显提高(P＜0.01)，LDH活性明显回落(P＜0.01)，细胞凋亡率下降(P＜0.05)。治疗3组的MTT吸光度OD值及细胞存活率达最高，LDH活性及细胞凋亡率达最低。
　　3.与AD体外模型组比较，治疗4组的吸光度OD值与细胞存活率均降低(P＜0.05)，LDH活性及细胞凋亡率明显提高(P＜0.01)。
　　（三）氧化损伤程度的评估
　　1.与正常对照组相比较，AD体外模型组的MDA含量显著升高(P＜0.01)，SOD活力显著降低(P＜0.01)，GSH含量明显回落(P＜0.01)。
　　2.与AD体外模型组比较，治疗1-3组的MDA含量均降低(P＜0.05)，SOD活力明显提高(P＜0.01)，总GSH含量明显提升(P＜0.01)。治疗3组的MDA含量达最低，SOD活力及总GSH含量最高。
　　3.与AD体外模型组比较，治疗4组的MDA含量显著抬高(P＜0.01)，SOD活力明显回落(P＜0.01)，GSH含量显著下降(P＜0.01)。
　　结论:
　　1.低剂量的木犀草素对于AD体外模型具有神经保护作用。
　　2.这种神经保护作用的机制可能源于减少AD体外模型的氧化损伤程度所致。
　　3.当木犀草素剂量增加到一定程度时，木犀草素的神经保护作用转变为细胞毒性作用。

目录

声明

摘要

第一部分 抗氧化剂普罗布考治疗阿尔茨海默病的临床研究

前言

对象与方法

一、对象

二、方法

结果

一、联合用药治疗组与单药治疗组疗效观察

二、联合用药治疗组与单药治疗组不良反应比较

讨论

结论

参考文献

第二部分 木犀草素对阿尔茨海默病体外模型的神经保护作用及其机制的研究

前言

材料与方法

一、材料

二、方法

三、实验数据处理

结果

(一)形态学观察

(二)神经保护作用的评估

(三)氧化损伤程度的评估

讨论

结论

参考文献

综述 氧化应激与阿尔茨海默病的研究进展

致谢