CXCR1/2拮抗剂G31P对获得性大疱性表皮松懈症皮肤损伤的影响

摘要

目的:获得性大疱性表皮松懈症(EpidermolysisbullosaacquisitaEBA)多数累及皮肤和黏膜表面，特别是口腔、鼻、咽、喉粘膜和结膜处出现红肿瘙痒，形成水疱、糜烂、疤痕等。EBA患者血循环中含有针对Ⅶ型胶原蛋白（COL-7）的自身循环IgG抗体，皮损部位的组织病理学检查显示病损部位真表皮分离，真表皮基底膜处有IgG抗体、C3补体的线性沉积，表皮下存在以嗜中性粒细胞为主的炎性细胞浸润。EBA模型小鼠主要在眼周、口唇周围、四肢躯干、尾部等部位发病，出现水疱、糜烂、疤痕等症状。本课题在成功建立EBA模型小鼠后，将其分成两组，分别在预定的时间注射G31P或NS。通过比较G31P组和NS组EBA模型小鼠的区别，观察CXCR1/2拮抗剂G31P是否能够抑制获得性大疱性表皮松懈症模型小鼠的皮肤损伤，是否能够缓解EBA模型小鼠的炎症，对EBA治疗提供理论依据。
　　方法:G31P配制:取1mgG31P粉末，加10mlNS配制成10μg/100μl的工作浓度溶液，每只小鼠注射10μg/20g（即100μl/只）。实验动物分组:取Balb/c小鼠20只，分为两组，每组各10只，分别为G31P组（雌雄各5只）、NS组（雌雄各5只）。动物模型建立:将GST-mCol7c和弗式完全佐剂(FCA)主动免疫兔子，提取血清后，纯化，得到致病性IgG抗体(P-IgG)，被动免疫Balb/c小鼠。实验第1、3、6、8、10天，G31P组注射G31P，NS组注射NS，实验第2、4、7天，两组均注射P-IgG（德国吕贝克大学皮肤病实验室赠送）。检测方法:实验第5、9天，EBA模型小鼠尾静脉取外周血、尾部末端取皮肤分别用于FACS(Gr-1)、IF/IHC。实验第11天，对小鼠的皮肤破损程度评分，第12天，解剖小鼠，取小鼠各脏器待用。外周血静置后取血清，用于流式细胞术微球阵列法FACS(CBA)检测细胞因子;耳部组织一部分室温存放在福尔马林中用于HE染色，另一部分放在空EP管内-80℃冻存用于直接免疫荧光(IF);病损部位的皮肤室温存放在福尔马林中用于HE染色;脾组织用于FACS(Gr-1、T/B)。
　　结果:
　　1.G31P组和NS组大体观察结果显示，两组均在耳部、眼周、尾部皮肤出现大疱、糜烂、疤痕等症状，但G31P组较NS组更晚出现症状且G31P组症状较NS组有所缓解;
　　2.G31P组EBA模型小鼠的皮损部位评分低于NS组(P＜0.05);
　　3.HE染色结果显示，NS组EBA模型小鼠病损部位（尾部、眼周、耳部）皮肤真表皮明显分离，表皮下可见以嗜中性粒细胞为主的炎性细胞大量浸润，而G31P组EBA模型小鼠病损部位皮肤真表皮分离不明显，表皮下可见少量炎性细胞浸润;
　　4.直接免疫荧光检测结果显示，G31P组和NS组均可见真表皮的分离，表皮下IgG和C3的线性沉积，荧光强度分析结果显示，P＞0.05，不具有统计学意义;
　　5.流式细胞术检测两组小鼠外周血Gr-1，第5天两组结果显示轻微差别(P＞0.05)，第9天NS组明显高于G31P组(P＜0.05);
　　6.流式细胞术检测两组小鼠脾组织Gr-1、CD3、CD9表达，两组结果(P＞0.05)未见显著性差异。
　　结论:
　　1.G31P可以明显减轻EBA模型小鼠的皮肤损伤症状;
　　2.G31P可以减少EBA模型小鼠表皮下炎性细胞浸润，缓解病损部位真表皮分离;
　　3.G31P可以减少EBA模型小鼠外周血中性粒细胞数量，但是对脾脏内的中性粒细胞、T细胞及B细胞数量没有影响;
　　4.G31P对表皮下IgG和C3线性沉积引起的EBA模型小鼠皮肤损害没有显著影响。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1、实验材料

1．1 试剂

1．2 试验设备和仪器

1．3 其他试剂及材料

1．4 动物

2、实验方法

2．1 G31P的配制

2．2 动物分组及EBA模型的建立

2．3 标本采集

2．4 标本处理

2．5 统计学分析

结果

讨论

结论

参考文献

综述 获得性大疱性表皮松懈症

致谢