三氟柳及其配合物抑制血小板聚集和诱导肝癌细胞凋亡的研究

摘要

背景：临床上用于心脑血管疾病的预防与治疗药物—阿司匹林，不仅作为抗血小板聚集的经典药物，又具有降低结肠癌，食管癌，肺癌，宫颈癌，乳腺癌，肝癌，皮肤癌等癌症的风险。但阿司匹林在用于癌症预防的过程中所引起的如胃肠道出血限制了其进一步应用。三氟柳，乙酰水杨酸结构类似物，亦具有抗血小板聚集作用，并应用于缺血性中风，脑梗塞，短暂缺血性发作等疾病的临床治疗，对比阿司匹林大大降低出血性风险。铜作为胞内的必需金属元素，其潜在的氧化还原活性使得铜参与了胞内众多生化过程。铜的失衡与癌症、神经退行性病变等许多疾病的发生有关，最近的研究发现铜的配合物可以作为蛋白酶体的抑制剂和凋亡诱导因子以用于癌症的预防与治疗。目前鲜有三氟柳及其配合物作用于肿瘤的报道。
　　目的：1.检测三氟柳及其金属离子配合物zhr-315的血小板聚集抑制作用;2.探究三氟柳及zhr-315对肝癌细胞株HepG2和Bel7402增殖抑制作用;3.观察三氟柳及zhr-315作用于细胞后形态的变化;4.比较三氟柳及zhr-315诱导HepG2和Bel7402凋亡的能力;5.探究三氟柳和zhr-315引起HepG2和Bel7402凋亡的分子机制，为三氟柳及其配合物的抗癌作用提供新的证据。
　　方法：1.采用体外实验的方法，制备富血小板血浆，测定三氟柳和zhr-315对大鼠血小板聚集的抑制作用;2.MTT法检测两种药物对肝癌细胞株HepG2和Be l7402的细胞增殖抑制作用;3.倒置光学显微镜观察药物作用后细胞形态的变化;4.Hoechst33258比较两种药物诱导细胞凋亡的能力;5.Western blot研究三氟柳和zhr-315引起细胞凋亡的分子机制
　　结果：1.三氟柳及zhr-315对于由ADP诱导的大鼠血小板聚集均有抑制作用，其IC50分别是1.764mM和0.513mM;2.三氟柳和zhr-315对HepG2和Bel7402细胞均抑制增殖，且在一定浓度范围内呈现时间和剂量依赖关系;其IC50值，三氟柳对HepG2和Bel7402细胞分别是:0.933±0.021 mM，0.716±0.141mM;zhr-315对HepG2和Bel7402细胞分别是:0.175±0.039mM，0.137±0.044mM;3.药物作用后细胞形态发生变化，胞质皱缩，内容物增多;4.相同浓度下对于同种细胞zhr-315较三氟柳具有更强的引起细胞凋亡的能力，HepG2中，0.45、0.93mM浓度下，zhr-315均诱导细胞凋亡，但并未发现三氟柳在此浓度下诱导细胞凋亡;0.36、0.72mM浓度时，zhr-315均能诱导Bel7402细胞凋亡，三氟柳却不能引起细胞的凋亡;5.三氟柳和zhr-315作用于细胞后，WB检测到caspase3，caspase9和PARP的断裂带，即药物通过内源性通路引起细胞凋亡，且与药物作用浓度呈一定的相关性;6.三氟柳和zhr-315作用于细胞后，WB检测到抗凋亡蛋白Bcl-2，Bcl-xl的降低，促凋亡蛋白Bax的升高，并与药物作用浓度相关。
　　结论：1.三氟柳及zhr-315对于血小板聚集具有抑制作用;2.三氟柳及zhr-315抑制肝癌细胞株HepG2和Bel7402的增殖;3.三氟柳及zhr-315能够诱导细胞凋亡，且zhr-315诱导强度大于三氟柳;4.两种药物是通过内源性通路引起的细胞凋亡，这揭示了三氟柳及其配合物可能具有预防癌症的功能，预示着在伴随血小板增多的癌症中可以考虑将三氟柳及其配合物作为辅助的治疗手段。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 三氟柳及其金属离子配合物zhr-315对血小板聚集的抑制作用

材料与方法

1．实验材料

2．实验方法

结果

1．三氟柳和zhr-315对血小板聚集抑制作用的比较

讨论

结论

参考文献

第二部分 三氟柳和zhr-315引起肝癌细胞HepG2，Bel7402凋亡作用的研究

材料和方法

1．实验材料

2．实验方法

结果

1．三氟柳和zhr-315抑制HepG2、Bel7402细胞的增殖

2．三氟柳和zhr-315对HepG2和Bel7402细胞的抑制增殖能力的比较

3．药物对细胞形态的影响

4．药物诱导细胞凋亡

5．Western blot检测药物作用细胞后蛋白表达水平

讨论

结论

参考文献

综述 三氟柳研究进展

致谢