穿心莲内酯类化合物的体外UGT代谢的研究

摘要

目的:研究穿心莲中主要成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯的体外葡萄糖醛酸化代谢，阐明其代谢结合位点、参与其代谢的主要尿苷二磷酸葡萄糖醛酸化转移酶(UGTs)单酶亚型、不同种属对穿心莲内酯类化合物的葡萄糖醛酸化代谢的种属差异、代谢产物的药理活性以及三种主要成分之间联合用药时可能存在的药物药物相互作用(DDI)。
　　方法:(1)体外代谢实验:采用不同种属混合肝微粒体和12种UGT重组单酶体外孵育的方法，对穿心莲内酯类化合物的葡萄糖醛酸化代谢进行研究，包括代谢酶的归属、不同种属对其代谢的种属差异以及代谢动力学的研究;(2)利用植物化学方法和波谱学方法分离鉴定穿心莲内酯类化合物的葡萄糖醛酸化的代谢产物;(3)通过LPS刺激RAW264.7细胞后的NO抑制作用，来测定原型和代谢产物的体外抗炎活性。
　　结果:穿心莲内酯类化合物在人肝微粒体中葡萄糖醛酸化代谢的代谢产物为19位β-D-葡萄糖醛酸化产物;UGTs单酶中UGT2B7、-1A3、-1A4、-2B4参与了它们葡萄糖醛酸化，其中UGT2B7为主要参与单酶亚型;穿心莲内酯和去氧穿心莲内酯在人肝微粒体中表现为双向代谢动力学，脱水穿心莲内酯表现为经典米氏代谢动力学，穿心莲内酯类化合物在单酶中均表现为米氏代谢动力学并得到了其相关动力学参数（Vmax， Km， Ki和CLint）;动物中除了大鼠对穿心莲内酯不发生葡萄糖醛酸化代谢外，穿心莲内酯类化合物19位葡萄糖醛酸化反应在其他种属中均有发现，穿心莲内酯类化合物的3位葡萄糖醛酸化反应在猪、猴中均有发生。此外，脱水穿心莲内酯的3位葡萄糖醛酸化反应在大鼠和小鼠中也有发生;活性研究表明:穿心莲内酯类化合物19位葡萄糖醛酸化代谢产物仍然具有一定的抗炎活性，但3位葡萄糖醛酸化产物除穿心莲内酯3位葡萄糖醛酸化产物仍具活性外，其余3位葡萄糖醛酸化产物无抗炎活性;此外，去氧穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对穿心莲内酯的葡萄糖醛酸化代谢表现为竞争性抑制，其Ki分别为2.5μM和12.8μM。
　　结论:本次研究中我们首次报道了穿心莲内酯类化合物在人和五种种属微粒体中的葡萄糖醛酸化代谢，确定了其在不同种属中的代谢产物的结构;UGT2B7是其葡萄糖醛酸化代谢中的主要参与单酶;值得注意的是人体内葡萄糖醛酸化代谢产物仍然具有一定的抗炎活性;人和不同种属对穿心莲内酯类化合物的葡萄糖醛酸化代谢存在较大的种属差异，人体主要为19位点葡萄糖醛酸化产物，动物种属中发现了3位葡萄糖醛酸化产物;穿心莲内酯类化合物在联合应用时，去氧穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对穿心莲内酯的葡萄糖醛酸化存在一定的抑制。这些发现都为以后穿心莲内酯类化合物的药代动力学研究和毒理学研究时动物模型的选择提供参考价值，同时也为穿心莲内酯类化合物的临床应用和其新药开发提供有益的建议。

目录

声明

摘要

(一)前言

第一部分 穿心莲内酯类化合物人的体外UGT代谢的研究

(二)材料和方法

1．材料

2．方法

(三)结果

1．穿心莲内酯类化合物人肝微粒体中UGT代谢产物的结构鉴定

2．穿心莲内酯类化合物在混合人肝微粒体中的孵育结果

3．穿心莲内酯类化合物在混合人肝微粒体以及不同单酶中的动力学分析

4．穿心莲内醋类化合物的UGT单酶归属

5．化学抑制实验

6．相关性分析

(四)讨论

第二部分 穿心莲内酯类化合物的体外UGT代谢的种属差异和代谢产物的药理活性研究

(二)材料和方法

1．材料

2．方法

(三)结果

1．穿心莲内醋类化合物在不同种属中的代谢产物的结构鉴定

2．穿心莲内酯类化合物在不同种属微粒体中的孵育HPLC分析结果

3．穿心莲内酯类化合物在不同种属微粒体中的动力学分析

4．穿心莲内酯类化合物UGT代谢产物的活性测定

(四)讨论

第三部分 穿心莲内酯类化合物之间联合用药的DDI的研究

(二)材料和方法

1．材料

2．方法

(三)结果

1．脱水穿心莲内酯和去氧穿心莲内酯对穿心莲内酯在混合人肝微粒体中UGT代谢的IC50值测定

2．脱水穿心莲内酯和去氧穿心莲内酯对穿心莲内酯在混合人肝微粒体中的UGT代谢的Ki测定

(四)讨论

(五)结论

参考文献

三、综述 穿心莲内酯类化合物的药理活性和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGTS)在药物代谢中的作用

四、攻读学位期间发表文章情况

致谢

缩略表

附图