Biodentine对MG-63细胞增殖及成骨作用的研究

摘要

目的:研究不同浓度Biodentine对入骨肉瘤细胞MG-63增殖及成骨作用的影响。
　　方法:将表面积S=75mm2的圆柱形研究材料置于1.5ml培养液中浸提24小时后，过滤除菌得到浓度为50 mm2/ml的Biodentine浸提液（即浓度比例记作1），1∶1连续稀释四次，得到五个浓度梯度的稀释液即:1、1/2、1/4、1/8和1/16。不同浓度的Biodentine分别作用于MG-63细胞，用CCK-8法分别于第1、3、5、7天检测细胞增殖情况。依据细胞增殖实验结果，选取1/16浓度Biodentine作用于MG-63细胞，于第1、3、5、7天，用Real-time PCR法检测MG-63细胞中成骨因子Runx2 mRNA表达情况;并于第10天和第14天行茜素红染色，观察MG-63细胞钙化结节形成情况。
　　结果:1.各时间点不同浓度Biodentine(BD)对MG-63细胞增殖的影响
　　(1) Biodentine作用于MG-63细胞第1天，活细胞数量与空白对照组比，1浓度组、1/2浓度组、1/8浓度组略有下降，1/4浓度组无明显变化，1/16浓度组增多。各组间活细胞数的差异无统计学意义(p＞0.05)。
　　(2) Biodentine作用于MG-63细胞第3天，活细胞数量与空白对照组比，1浓度组略有下降，1/2浓度组，1/4浓度组和1/8浓度组无明显变化，1/16浓度组略有增多。各组间活细胞数的差异无统计学意义(p＞0.05)。
　　(3) Biodentine作用于MG-63细胞第5天，活细胞数量与空白对照组比，1浓度组明显降低，差异有统计学意义(p＜0.05);1/2浓度组略降低，差异无统计学意义
　　(p＞0.05);1/4浓度组、1/8浓度组略有升高，差异无统计学意义(p＞0.05);1/16浓度组明显升高，差异有统计学意义(p＜0.05)。
　　(4) Biodentine作用于MG-63细胞第7天，活细胞数量与空白对照组比，1浓度组、1/2浓度组明显降低，差异有统计学意义(p＜0.05);1/4浓度组、1/8浓度组略降低，差异有统计学意义(p＜0.05);1/16浓度组略有上升，差异无统计学意义(p＞0.05)。
　　2.Biodentine对MG-63细胞成骨性的影响
　　(1) Runx2mRNA的表达
　　1/16浓度BD作用于MG-63细胞第1天时，MG-63细胞Runx2 mRNA的表达量为空白对照组的1.14倍，差异有统计学意义(p＜0.05);第3天时，Runx2 mRNA的表达量为空白对照组的5.29倍，差异有统计学意义(p＜0.05);第5天时，Runx2mRNA的表达量为空白对照组的1.08倍，差异有统计学意义(p＜0.05);第7天时，Runx2 mRNA的表达量为空白对照组的2.11倍，差异有统计学意义(p＜0.05)。
　　(2)不同处理组的茜素红染色
　　1/16浓度BD作用于MG-63细胞第10天时，与空白对照组相比，肉眼均未见矿化结节，镜下观察均可见2～3处小面积红色钙化物，两组之间未见显著差异。
　　1/16浓度BD作用于MG-63细胞第14天时，空白对照组可见6孔板内大面积红色钙化物;1/16浓度BD组见红色钙化物，面积比对照组更广泛，颜色更深。
　　结论:1.不同浓度的Biodentine对MG-63细胞增殖的作用不同，50mmVml的Biodentine可抑制细胞增殖，低于该浓度的浸提液无明显的抑制细胞增殖作用。
　　2.Biodentine能够使MG-63细胞Runx2 mRNA表达升高，可加强MG-63细胞的成骨作用。

目录

声明

摘要

前言

材料和方法

1．实验材料和仪器

1．1 细胞及研究材料

1．2 主要试剂和耗材

1．3 实验仪器设备

1．4 试剂的配置

2．实验方法

2．1 人骨肉瘤细胞MG-63培养

2．2 Biodentine浸提液的制备

2．3 CCK-8法检测Biodentine对MG63细胞增殖的影响

2．4 Runx2 mRNA表达的检测

2．5 茜素红染色

实验结果

1．各时间点不同浓度Biodentine对MG-63细胞增殖的影响

2．Runx2 mRNA的表达

3．茜素红染色

讨论

结论

参考文献

综述 Biodentine的生物活性研究进展

缩略语表

致谢