肠易激综合征患者免疫功能与肠道菌群变化的相关性研究

摘要

背景:
　　肠易激综合征(irritable bowel syndrome，IBS)是一种胃肠道功能紊乱性疾病，以长期的腹痛、腹胀且伴随着排便习惯改变为主要病征，并在排除胃肠道器质性病变后才能诊断。IBS也是全球人群患病率较高的疾病，并呈现逐年增加的趋势。由于该病病因目前仍未明确，缺乏客观形象的形态学改变和相关生化指标的异常改变，就使得它的诊断与治疗面临着些许困难。据统计，在西方国家IBS的患病率高达10％-20％，在我国也有10％的人群因为IBS带来的影响而降低了生活质量。据统计，IBS在中青年的发病率要高于老年人，而女性、男性患病人数的比例为2∶1。IBS的症状复杂且多变，会长期反复发作，给生活带来的影响越发引起了人们的广泛关注，很多临床及实验研究主要围绕IBS的病因而展开，并根据其发病机制来制定有效的治疗方案。目前IBS病因仍不明确，据报道，可能与肠道动力紊乱、精神心理因素、内脏感觉异常、脑-肠轴、以及遗传等因素有关。近年来发现IBS的发病与免疫功能的变化和肠道菌群的变化有关，但是具体关联所见的报道较少。本研究的目的就是探讨IBS患者免疫功能与肠道菌群的相关性。
　　目的:
　　1.通过对比IBS和健康人群的白细胞总数、淋巴细胞百分比、单核细胞百分比、粒细胞百分比的差异性，探讨IBS患者免疫细胞指标的特异性变化。
　　2.通过对比分析IBS患者与健康人群肠道菌群特性和多样性变化，来讨论肠道菌群失调对IBS的可能影响。
　　方法:
　　1.病例选择:按照罗马Ⅲ诊断标准确定IBS病例，并收集IBS患者的粪便样本，同时采集健康体检者的粪便样本作为对照。IBS组来自大连市大连大学附属中山医院2014年4月-2014年9月期间在消化科病房住院的IBS患者24例，年龄在21-70岁不等。其中男性标本10例，女性14例。
　　2.粪便样本采集:所有标本均取自被选IBS患者在清晨自然排出的新鲜无污染粪便，用一次性器具挑取5g左右，置入环氧乙烷消毒过的大便标本盒内，并立即密封标本放置于-80℃中冷冻。采集过程时间严格控制在30min以内，为肠道菌群分析做好准备。
　　3.血液样本采集:采用真空采血法，在清晨空腹的状态下抽取IBS患者的静脉血2ml并注入EDTA-K2的抗凝管中（采血前一天应与患者说明晚上十点后至次日清晨采血前需要禁食水，且采血前不要做剧烈运动，避免外界刺激），轻轻混匀后立即送往检验科进行血常规检测（检测白细胞总数、淋巴细胞百分比、单核细胞百分比、粒细胞百分比），机器型号为Sysmex XE-2100全自动血液分析仪。
　　4.检测IBS患者的白细胞总数、淋巴细胞百分比、单核细胞百分比、粒细胞百分比值，并与健康人群参考值做对比。
　　5.利用PCR-DGGE指纹图谱技术分析IBS患者和健康人群肠道菌群间的差异。
　　6.统计学方法:利用SPSS19.0、Quantity One4.6.2、 Image Lab、Canoco4.5等软件进行。
　　结果:
　　1.IBS患者的免疫学细胞的变化
　　IBS患者免疫功能与健康人群相比，IBS患者的白细胞总数(WBC)、淋巴细胞百分比(LY％)、单核细胞百分比(MO％)明显降低(P＜0.05)，但粒细胞百分比(Neu％)没有显著差异。
　　2.IBS患者肠道菌群的变化
　　IBS患者肠道菌群与健康人群相比，IBS患者的粪便标本条带数为19.00±2.83，健康对照组条带数为26.79±3.46，从电泳图谱条带数看，IBS患者明显低于健康对照组，具有统计学意义(P＜0.01)。从主成分分析结果可以看出，IBS患者的菌群与健康对照组形成较为明显的两个聚类群。
　　结论:
　　1.与健康人群相比，IBS患者的免疫细胞数减少，白细胞总数、淋巴细胞百分比、单核细胞百分比都有显著差异。
　　2.IBS患者存在肠道菌群失调，且肠道菌群的生物多样性减低。
　　3.IBS患者肠道菌群多样性的减少的同时，患者的免疫细胞水平也降低，可能是由于菌群影响了其免疫功能而导致IBS的发生。

目录

声明

摘要

前言

材料和方法

一、材料

1．标本采集

2．主要试剂

3 主要实验仪器

4．分析软件

二、方法

1．病例选择

2．主要溶液配置

3．粪便基因组的DNA提取

4．PCR-DGGE分析

结果

1．IBS患者的免疫学细胞的变化

2．DGGE图谱分析

3．主成分分析(PCA)

讨论

结论

参考文献

综述 肠道菌群失调与肠易激综合征的研究进展

致谢