脓毒症患者IL-32的差异及PB1对LPS介导的THP-1源性巨噬细胞炎症反应的抑制作用

摘要

目的:脓毒症是急诊医学面临的重要问题之一，其病情进展快，病死率高，每年发病率不断上升，而LPS与TLR4受体通路在其发病机制中起到重要作用，LPS通过激动TLR4信号转导，促使单核与巨噬细胞产生大量炎症介质，对炎症过度反应，导致脓毒症发生发展。现有研究表明一种近年来新发现的细胞因子IL-32与TLR-4受体通路密切相关，可与TNF-α相互刺激分泌，导致炎症反应加剧。本实验通过比较脓毒症患者血清中TNF-α与IL-32的含量关系，并通过细胞造模研究原花青素B1(PB1)与TLR-4受体阻断剂CLI-095对LPS刺激下THP-1细胞源性巨噬细胞分泌TNF-α与IL-32的作用。探讨IL-32在脓毒症中发挥的作用及可能的机制。
　　方法:临床研究:按脓毒症诊断标准，选取我院急诊科2015.05-2016.4期间收治32例脓毒症患者，根据结局分为死亡组与非死亡组，采集入院后第1、3、5、7、14日清晨血清样本，用ELISA法检测每样本的TNF-α与IL-32浓度。细胞实验:稳定传代的THP-1细胞，经PMA诱导48h转化为巨噬细胞，用CCK-8法检测PB1对细胞的毒性作用。将诱导后细胞分为空白对照组，CLI-0955μg/ml预孵组，CLI-09510μg/ml预孵组，PB12.5μg/ml预孵组，PB15μg/ml预孵组，PB110μg/ml预孵组，PB120μg/ml预孵组，0加药组共8组。按相应组别加药后孵育4小时，每组加入LPS100ng/ml，18小时后取细胞培养上清检测TNF-α与IL-32浓度。将收集的数据结果应用SPSS22.0进行统计描述，用ANOVA等方式检验各组数据间差异，取P＜0.05时认为有统计学意义。
　　结果:临床研究中32例患者，在多数检测时间点死亡组患者的血清中TNF-α与IL-32浓度明显高于非死亡组，差别经检验具有统计学意义(P＜0.05)。细胞实验中成功地对THP-1细胞进行了诱导，使其转化为巨噬细胞。并在此基础上用LPS100ng/ml刺激细胞，建立了“脓毒症”细胞模型，以模仿脓毒症在人体内发生过程。用CLI-095阻断TLR4信号通路可明显降低LPS刺激下THP-1细胞源性巨噬细胞细胞因子TNF-α与IL-32的产生。PB1亦起到CLI-095相似的抗炎作用，并在一定的PB1浓度范围内呈剂量依赖性。PB1对处于炎症反应中的THP-1细胞源性巨噬细胞发挥最大的保护作用的最佳浓度为10μg/ml。
　　结论:TNF-α与IL-32在一定程度上指示了脓毒症的严重程度。阻断TLR4信号通路可明显降低LPS刺激下THP-1细胞源性巨噬细胞细胞因子TNF-α与IL-32的产生。PB1可抑制LPS刺激下THP-1细胞源性巨噬细胞细胞因子TNF-α与IL-32的产生具有确切的抗炎作用。

目录

声明

摘要

(一)前言

第一部分 临床研究

(二)材料与方法

1．主要材料与仪器

2．实验方法

3．检测TNF-α与IL-32

4．数据处理

(三)结果

(四)讨论

(五)结论

第二部分 细胞实验

(二)材料和方法

1．主要材料与仪器

2．实验方法

(三)结果

3．1 PMA细胞诱导效果

3．2 CCK-8检测PB1对THP-1细胞源性巨噬细胞的毒性作用

3．3 PB1对LPS诱导THP-1细胞源性巨噬细胞TNF-α分泌的影响

3．4 PB1对LPS诱导THP-1细胞源性巨噬细胞IL-32分泌的影响

(四)讨论

(五)结论

参考文献

综述 IL-32：亚型及信号转导通路

攻读学位期间发表论文情况

致谢