MiR-330-3p表达水平与ccRCC临床相关性及其作用机制的初步研究

摘要

肾癌为较常见的恶性肿瘤之一，其中，肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma，ccRCC)占70-80％。手术治疗是目前最有效的治疗方案，但术后复发的患者约占20-40％，肾癌患者的平均生存期约为26个月。因此，寻找有效的肾癌治疗靶标分子，及时对其作用机制研究，意义重大。
　　miRNA是一类高度保守的内源性非编码小RNA，长度约为21nt，普遍存在于真核生物中。成熟miRNA通常与靶基因的3'-UTR区碱基通过不完全互补配对，使mRNA降解或抑制mRNA翻译，调控基因的表达。miRNA参与调控细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡等行为，备受关注。miR-330表达失常与多种肿瘤相关，并在不同肿瘤类型的细胞和组织中表达，呈现一定特异性。目前尚无关于miR-330-3p在ccRCC中作用及机制的研究。
　　目的:1.miR-330-3p在ccRCC患者临床样本组织中的表达水平及其临床相关性。2.miR-330-3p差异表达对786-O和ACHN细胞恶性表型影响。3.对miR-330-3p调控ccRCC细胞恶性行为分子机制进行初步研究。
　　方法:1.qRT-PCR法检测miR-330-3p在42例ccRCC患者临床组织中表达水平，运用unpaired Student's t-test或One-way ANOVA方法，分析miR-330-3p表达水平变化与临床病理参数的相关性。2.采用LipofetaminTM2000转染法，在786-O、ACHN中转染miR-330-3p mimic/Inhibitor，及其阴性对照miR-330-3p mimicNC/miR-330-3p Inhibitor NC，qRT-PCR法检测miR-300-3p表达水平。3.采用LipofetaminTM2000转染法，在786-O、ACHN中转染miR-330-3p mimic，及阴性对照miR-330-3p mimic NC，MTT法考证miR-330-3p高表达对786-O、ACHN增殖影响，运用Transwell小室法和划痕实验考证miR-330-3p高表达对786-O、ACHN迁移、侵袭和运动能力影响。4.采用LipofetaminTM2000转染法，在786-O、ACHN中转染miR-330-3p Inhibitor,及阴性对照miR-330-3p Inhibitor NC，MTT法考证miR-330-3p低表达对786-O、ACHN增殖影响，运用Transwell小室法和划痕实验考证miR-330-3p低表达对786-O、ACHN迁移、侵袭和运动能力影响。4Western blot法检测MMP2、P53、p-Akt、p-Mek在ccRCC患者肿瘤组织和癌旁正常组织中表达水平;western blot法检测MMP2、P53、p-Akt、p-Mek在miR-330-3p低/高表达786-O中水平变化。
　　结果:1.与癌旁正常组织相比，miR-330-3p在29例ccRCC患者临床肿瘤组织中水平升高(69.05％)，在13例患者肿瘤组织中水平降低(30.95％)，其整体水平上升138.24％(P=0.0229)。miR-330-3p高表达与ccRCC Fuhrman分级正相关，与Fuhrman1-2患者相比，miR-330-3p在Fuhrman3-4级ccRCC患者样本中表达水平升高147.2％(P=0.0477)，与患者年龄、性别、侧别和TNM分期无关。2.与mimic NC组相比，miR-330-3p表达水平升高，786-O和ACHN的增殖、迁移、侵袭和运动能力增强。3.与Inhibitor NC组相比，miR-330-3p表达水平降低抑制786-O和ACHN的增殖、迁移、侵袭和运动能力。4miR-330-3p高表达抑制786-O中P53蛋白水平，增强MMP2、p-Akt、p-Mek蛋白表达水平;786-O中下调miR-330-3p，P53蛋白水平上调，MMP2、p-Akt、p-Mek蛋白水平下调;与癌旁正常组织相比，P53蛋白在ccRCC患者肿瘤组织中水平降低，MMP2、p-Akt、p-Mek蛋白水平明显升高。
　　结论:1.miR-330-3p水平升高潜在促进ccRCC发生发展并与患者Fuhrman分级正相关，与其他临床参数无关。2.miR-330-3p表达水平变化与786-O、ACHN的增殖、迁移、侵袭和运动能力正相关。3.miR-330-3p影响P53，MMP2，p-Akt，p-Mek表达水平，影响ccRCC细胞的恶性表型，影响ccRCC的发生发展。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 MiR-330-3p在ccRCC中差异表达及临床相关性分析

材料与方法

1．材料

2．方法

结果

2．miR-330-3p表达水平与ccRCC患者临床参数间相关性分析

讨论

小结

参考文献

第二部分 MiR-330-3p低／过表达对786-O／ACHN恶性行为影响

材料与方法

1．材料

2．方法

结果

2．miR-330-3p水平变化对786-O、ACHN细胞增殖能力的影响

3．miR-330-3p水平变化对786-O、ACHN细胞迁移能力的影响

4．miR-330-3p水平变化对786-O、ACHN细胞侵袭能力的影响

5．miR-330-3p水平变化对786-O、ACHN细胞运动能力的影响

讨论

小结

参考文献

第三部分 MiR-330-3p影响ccRCC细胞恶性行为的分子机制研究

材料与方法

1．材料

2．方法

结果

2．ccRCC患者组织样本中p-Akt、P53、p-Mek、MMP2的表达水平

讨论

小结

参考文献

综述 miR-330与肿瘤

致谢