白眉蝮蛇蛇毒磷脂酶A的神经毒性研究

摘要

论文研究优化了Gln49-PLA2的分离方法，仅采用HitrapSP阳离子交换、Superdex75凝胶过滤层析两步即从长白山白眉蝮蛇蛇毒中分离出该蛋白。通过添加保护剂，延长了Gln49-PLA2抗凝血酶活性的保存时间；确定了保护剂及保存条件：添加5﹪(w/v)海藻糖，Gln49-PLA2终浓度为0.6mg/ml，-20℃保存14天，活性为原来的80.6﹪，7-14天活性稳定。 动物实验测得其LD50为18.2mg/kg。热板实验中，腹腔注射Gln49-PLA2的615小鼠痛阈比空白对照组显著提高，证明了其镇痛活性且镇痛作用呈剂量依赖性；钠洛酮可有效拮抗Gln49-PLA2的镇痛活性，说明其镇痛机理可能与阿片受体有关。电生理分析，100ug/ml的Gln49-PLA2可降低蟾蜍坐骨神经样本的动作电位和传导速度，说明其可能会影响神经元上一些离子通道的性质。 膜片钳实验结果显示，Gln49-PLA2对SHSY5Y细胞钠离子通道无明显作用，但可减弱钾离子通道电流和电导。MTT测量，CsCl对Gln49-PLA2的作用无影响，说明该蛋白不是作用于延迟整流钾通道而发挥其神经毒性；钠洛酮可抑制Gln49-PLA2对SHSY5Y细胞的作用，说明该蛋白通过直接或间接激活阿片受体发挥作用，但Gln49-PLA2对钾离子通道的抑制说明其并不直接作用于阿片受体。

目录

文摘

英文文摘

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引 言

1文献综述

2 Gln49-PLA2的纯化及保存

3 Gln49-PLA2神经毒素的生理作用

4 Gln49-PLA2神经毒性的细胞及膜片钳分析

结 论

展望

参考文献

攻读硕士学位期间发表学术论文情况

致 谢