长白山白眉蝮蛇毒类凝血酶Gussurobin基因的克隆、表达与纯化（英文）

摘要

根据同源性 ,在高度保守的上游信号肽区域设计引物 ,通过RT PCR反应 ,从长白山白眉蝮蛇 （Gloydiusussurensis）毒腺总RNA中克隆得到类凝血酶 gussurobincDNA ,双向测序得到 gussurobin基因的全序列并由此推测出相应的氨基酸序列。与其他已知的类凝血酶不同 ,gussurobin只含有一个可能的糖基化位点 ,即Asn12 4 Ser12 5 Thr12 6。将gussurobin基因克隆到表达载体 pPIC9K中 ,电极转化至毕氏酵母菌株GS115中 ,经G418抗性筛选和营养缺陷型筛选获得重组子。经摇瓶培养 ,获得表达。经过柱层析分离 ,获得SDS PAGE电泳纯的重组gussurobin。