自然衰老小鼠皮肤组织中mtDNA片段缺失和线粒体T-ATP酶活性改变及黄芪的干预作用

摘要

目的：本课题从自由基、分子生物学、基因水平等多个层次探讨自然衰老小鼠皮肤组织中mtDNA片段缺失及线粒体T-ATP酶活性改变以及黄芪提取液对这些改变的干预作用，进一步探讨中药黄芪提取液抗氧化损伤的效果及延缓衰老的机制，为中药美容保健品及中药天然化妆品的开发提供科学依据。 材料与方法：选用健康昆明种小鼠共计72只，雌雄各半。其中3月龄小鼠12只作为青年对照组(A)，其余60只为17月龄的老龄小鼠，将这些老龄小鼠再随机分为5组，每组12只，即老龄空白对照组(B)、黄芪低剂量组(C)、黄芪中剂量组(D)、黄芪高剂量组(E)和维生素EC组(F)。在自然环境下，按性别及组别分12笼喂养(每笼6只)，常规饲食饮水。其中A组和B组灌胃生理盐水(20ml/kg)；C组、D组、E组分别灌胃黄芪提取液4g/kg、8g/kg、16g/kg；F组灌胃维生素EC混悬液3mg/kg，每日灌胃1次，连续操作30天。30天后用电镜观察小鼠皮肤组织超微结构的改变，以生化分析方法测定皮肤组织中超氧化物岐化酶(SOD)活性、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量、羟脯氨酸(HYP)含量、线粒体总ATP酶活性，运用PCR法测定皮肤组织中mtDNA片段缺失情况。 结果：与青年对照组相比较，老龄空白对照组(P＜0.01)、黄芪低剂量组(P＜0.01)、黄芪中剂量组(P＜0.01)、黄芪高剂量组(P＜0.01)、维生素EC组(P＜0.05)小鼠皮肤组织中SOD活性均明显降低；老龄空白对照组(P＜0.01)、黄芪低剂量组(P＜0.05)、黄芪中剂量组(P＜0.01)、黄芪高剂量组(P＜0.01)、维生素EC组(P＜0.05)羟脯氨酸含量均减少；老龄空白对照组(P＜0.01)、黄芪低剂量组(P＜0.01)、黄芪中剂量组(P＜0.01)、黄芪高剂量组(P＜0.01)、维生素EC组(P＜0.05)MDA含量均显著增高；老龄空白对照组(P＜0.01)、黄芪低剂量组(P＜0.01)、黄芪中剂量组(P＜0.01)、黄芪高剂量组(P＜0.01)、维生素EC组(P＜0.01)线粒体ATP酶活性均明显降低。与老龄空白对照组比较，黄芪低剂量组(P＜0.05)、黄芪中剂量组(P＜0.01)、黄芪高剂量组(P＜0.01)、维生素EC组(P＜0.01)均可提高SOD活性;黄芪低剂量组(P＜0.05)、黄芪中剂量组(P＜0.05)、黄芪高剂量组(P＜0.05)、维生素EC组(P＜0.05)均可提高羟脯氨酸的含量；黄芪低剂量组(P＜0.01)、黄芪中剂量组(P＜0.01)、黄芪高剂量组(P＜0.01)、维生素EC组(P＜0.01)均可减少MDA含量；黄芪低剂量组(P＜0.05)、黄芪中剂量组(P＜0.05)、黄芪高剂量组(P＜0.05)、维生素EC组(P＜0.01)均可提高皮肤组织中线粒体ATP酶活性。运用PCR法检测皮肤组织中mtDNA片段缺失程度，从电泳结果及mtDNA缺失型/mtDNA野生型的光密度比值结果来看，与青年对照组比较，老龄空白对照组(P＜0.01)和黄芪中剂量组(P＜0.05)小鼠皮肤组织中mtDNA(3867bp)片段缺失明显；与老龄空白对照组比较，黄芪中剂量组(P＜0.01)小鼠皮肤组织中mtDNA(3867bp)片段缺失的光密度比值显著减少。 结论：自然衰老小鼠的皮肤组织中有明显的氧化损伤，胶原蛋白减少，存在mtDNA片段缺失，线粒体ATP酶活性明显降低。中药黄芪可通过清除自由基，提高皮肤中羟脯氨酸的含量及线粒体ATP酶活性，提高线粒体呼吸功能，减少mtDNA片段缺失的形成，促进成纤维细胞合成胶原，提高机体抗氧化能力，从而发挥延缓衰老的作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：中英文名词术语对照

前言

实验一自然衰老小鼠皮肤组织超微结构的改变及黄芪的干预作用

1实验材料与方法

2实验结果与分析

3小结

参考文献

实验二自然衰老小鼠皮肤组织抗氧化能力的改变及黄芪的干预作用

1实验材料与方法

2实验结果与分析

3小结

参考文献

实验三自然衰老小鼠皮肤组织线粒体T-ATP酶活性的改变及黄芪的干预作用

1实验材料与方法

2实验结果与分析

3小结

参考文献

实验四自然衰老小鼠皮肤组织mtDNA片段缺失及黄芪的干预作用

1实验材料与方法

2实验结果与分析

3小结

参考文献

讨论

结论

参考文献

文献综述

综述一 脾肺气虚与皮肤衰老的关系

综述二 皮肤自然衰老的研究进展

致谢

个人简历