首页> 中文学位 >大菱鲆溶藻弧菌噬菌体制剂制备及其应用效果评价
【6h】

大菱鲆溶藻弧菌噬菌体制剂制备及其应用效果评价

代理获取

目录

引言

1 文献综述

1.1 大菱鲆养殖现状

1.1.1 大菱鲆简介

1.1.2 大菱鲆细菌性疾病简介

1.2 溶藻弧菌简介

1.2.1 水产养殖中常见的弧菌病及其病原菌

1.2.2 溶藻弧菌

1.3 噬菌体在水产中的应用及其安全性

1.3.1 噬菌体简介

1.3.2 噬菌体在水产养殖中的应用

1.3.3 噬菌体安全性

1.4 噬菌体保藏方法

1.4.1 噬菌体保藏方法

1.4.2 植物提取物在水产中的应用

1.4.3 大蒜素简介

1.5 本论文研究意义

1.6 本论文研究思路

1.7 技术路线

2 噬菌体治疗大菱鲆溶藻弧菌感染效果研究

2.1 引言

2.2 实验材料与设备

2.2.1 实验动物

2.2.2 实验条件

2.2.3 实验菌种

2.2.4 实验噬菌体

2.2.5 引物合成

2.2.6 实验主要试剂

2.2.7 实验溶液的配制

2.2.8 实验仪器

2.3 实验方法

2.3.1 病原菌活化

2.3.2 溶藻弧菌的分子生物学鉴定

2.3.3 攻毒用溶藻弧菌制备

2.3.4 半数致死量(LD50)测定

2.3.5 噬菌体扩增

2.3.6 噬菌体效价测定

2.3.7 噬菌体浓缩

2.3.8 大菱鲆溶藻弧菌攻毒的噬菌体治疗实验

2.4 实验结果与分析

2.4.1 溶藻弧菌的分子生物学鉴定实验结果

2.4.2 病原菌半数致死量(LD50)实验结果

2.4.3 大菱鲆溶藻弧菌攻毒的噬菌体治疗实验结果

2.5 讨论

2.6 小结

3 溶藻弧菌噬菌体PVA1安全性研究

3.1 引言

3.2 实验材料与设备

3.2.1 实验动物与养殖条件

3.2.2 实验主要试剂

3.2.3 实验溶液配制

3.2.4 实验仪器

3.3 实验方法

3.3.1 噬菌体浓缩纯化

3.3.2 溶藻弧菌噬菌体急性腹腔注射攻毒实验

3.3.3 溶藻弧菌噬菌体亚慢性腹腔注射攻毒实验

3.3.4 麻醉与解剖

3.3.5 血清生化检验

3.3.6 组织切片制作

3.3.7 HE染色

3.4 实验结果

3.4.1 溶藻弧菌噬菌体急性腹腔注射攻毒实验结果

3.4.2 溶藻弧菌噬菌体亚慢性腹腔注射攻毒实验结果

3.4.3 血清生化检验实验结果

3.4.4 溶藻弧菌噬菌体亚慢性腹腔攻毒组织切片观察实验结果

3.5 讨论

3.6 小结

4 可常温保存的溶藻弧菌噬菌体制剂制备

4.1 引言

4.2 实验材料与设备

4.2.1 实验动物与养殖条件

4.2.2 实验主要试剂

4.2.3 实验溶液配制

4.2.4 实验主要仪器

4.3 实验方法

4.3.1 大蒜素(40%)最小抑菌浓度(MIC)测定法

4.3.2 溶藻弧菌噬菌体制剂制备

4.3.3 溶藻弧菌噬菌体制剂应用效果评价

4.4 实验结果

4.4.1 大蒜素(40%)最小抑菌浓度(MIC)测定实验结果

4.4.2 溶藻弧菌噬菌体制剂制备实验结果

4.4.3 溶藻弧菌噬菌体制剂应用效果评价实验结果

4.5 讨论

4.6 小结

结论

展望

参考文献

致谢

展开▼

摘要

大菱鲆(Scophthalmus maximus L)是我国北方沿海地区主要养殖的经济名贵鱼类,具有极高的营养价值和商业价值。但随着大菱鲆养殖产业的日益发展,以弧菌为病原菌的细菌性病害也越来越严重,且此病一旦发生,病鱼死亡率可高达15%以上。噬菌体这种天然抑菌剂绿色、安全、环保,相对于传统的抗生素药物具有不引发耐药性、不残留、对环境无污染等优点。 本研究以溶藻弧菌噬菌体PVA1为主要研究对象,考察其治疗效果和安全性,并研制出一种可常温保存的溶藻弧菌噬菌体制剂,同时对其应用效果进行评价。主要工作内容如下: (1)验证了溶藻弧菌对大菱鲆的致病性,并对由溶藻弧菌引起的大菱鲆弧菌病的治疗效果进行考察,结果显示:溶藻弧菌浸浴攻毒半数致死量为7.85×106CFU/mL,腹腔攻毒半数致死量为1.52×106CFU/g;浸浴攻毒治疗时MOI≈10即浓度为2.66?107PFU/mL为最佳治疗浓度;腹腔注射攻毒治疗结果为MOI≈10实验组治疗效果明显。 (2)溶藻弧菌噬菌体PVA1急、亚慢性腹腔攻毒实验结果显示,急性腹腔注射攻毒中100倍治疗浓度的溶藻弧菌噬菌体不会引起大菱鲆短期内死亡,并未检测出溶藻弧菌噬菌体LC50;为期1个月的亚慢性腹腔注射攻毒对实验大菱鲆生存率、体重体长无明显影响;本部分实验对大菱鲆各项血浆生化、肝脏、肾脏和脾脏组织细胞无显著性影响。 (3)对大蒜素在常温下对噬菌体的保藏作用进行研究,研发出一种溶藻弧菌噬菌体制剂其配方为:含有4.32?107PFU/mL噬菌体、0.1250mg/mL大蒜素、2.5mmol/mLNaCl和5.0mmol/mL MgCl2,并对其应用效果进行评价结果显示本噬菌体制剂实验组大菱鲆生存率为70.00%,与5mg/L强力霉素(Doxycycline)实验组76.7%生存率无显著性差异。

著录项

相似文献

  • 中文文献
  • 外文文献
  • 专利
代理获取

客服邮箱:kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备:11010802029741号 ICP备案号:京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有
  • 客服微信

  • 服务号