肠球菌抗生素抗性指纹图谱库的建立及其准确性研究

摘要

抗生素抗性分析法(Antibiotic Resistance Analysis，ARA)作为经济有效的的粪便污染源示踪工具，在欧美等国已开展并得到了应用。本文在研究肠球菌具有ARA方法示踪因子可行性的基础上，检测了来自人、狗、鸡、牛、猪五个物种源粪便中500株肠球菌的抗生素抗性，并对其应用判别分析法构建了抗生素抗性指纹图谱库，得出了指纹图谱库的准确性并对其影响因素展开讨论。目的在于合理有效地构建抗生素抗性指纹图谱库，促进我国利用ARA法在识别粪便源技术中的应用。主要结果如下：
　　 (1)不同物种源粪便中的肠球菌与肠球菌标准菌株在模拟的自然海水环境下，存活量随时间逐渐衰减，生存天数为18～20天，但不同物种来源的肠球菌与肠球菌标准菌株的存活规律之间略有差异；肠球菌的抗生素抗性在始终未发生变化，并且与其原始的抗生素抗性保持一致。因此选择肠球菌作为ARA的示踪因子。
　　 (2)对500株肠球菌抗生素抗性特征进行耐药率及多重耐药性分析，结果表明五个物种源之间的抗生素抗性具有差异显著性，可以用于抗生素抗性指纹图谱库的构建；对五个物种源具有的耐药表型重叠情况统计分析发现人源与其他物种表型重叠数较多，可能导致指纹图谱库中人源的准确性相对其他物种源低。
　　 (3)应用判别分析法构建的抗生素抗性指纹图谱库，在任何一种判别模式下稳定性良好，在金州湾vs星海湾、人源vs非人源判别模式下得到的准确性最高，分别为71.0％与69.0％，应用验证组合得出本数据库最适的判别模式为人源vs非人源。
　　 (4)随机抽取的样本量≥80％时指纹图谱库的准确性基本一致，ARCC在57.8％～58.2％之间，样本量不是影响本指纹图谱库的主要影响因素；在日后工作过程中可以考虑增加抗生素种类，并去掉万古霉素，氯霉素与磷霉素可能会提高抗生素抗性指纹图谱库的准确性。

目录

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引言

第1章绪论

1.1粪便的非点源污染

1.1.1我国粪便污染的现状

1.1.2粪便污染对水体的污染与危害

1.1.3控制粪便污染关键

1.1.4我国非点源污染识别研究现状

1.2 ARA方法识别粪便污染源概述

1.2.1 ARA识别粪便污染源应用原理

1.2.2 ARA的技术关键——示踪因子

1.2.3 ARA应用方法学研究

1.2.4 ARA与其他粪便污染源示踪方法比较

1.3 ARA识别粪便污染源研究现状

1.3.1 ARA识别粪便污染源理论研究

1.3.2 ARA识别粪便污染源应用研究

1.4本论文的设计思想

第2章肠球菌海水环境中抗生素抗性指纹图谱的稳定性研究

2.1材料

2.1.1菌株来源

2.1.2药品与试剂

2.1.3主要仪器

2.1.4海水样品

2.2方法

2.2.1水样前期处理

2.2.2自然海水环境下肠球菌的生存规律测定方法

2.2.3肠球菌抗生素抗性指纹图谱稳定性检测

2.3结果与分析

2.3.1模拟自然海水环境下肠球菌的存活规律

2.3.2模拟自然海水环境下肠球菌抗生素抗性稳定性

2.4讨论

2.5结论

第3章不同物种源肠球菌的抗生素抗性分析

3.1材料

3.1.1菌株来源

3.1.2药品与试剂

3.1.3主要仪器

3.2方法

3.2.1细菌抗生素抗性检测

3.2.2药敏试验结果读取及判定

3.2.3数据分析

3.3结果与分析

3.3.1五个物种源肠球菌耐药率结果

3.3.2五个物种源的肠球菌对十种抗生素的多重耐药性分析结果

3.3.3五个物种源的肠球菌耐药表型重叠率分析结果

3.4讨论

3.5结论

第4章肠球菌抗生素抗性指纹图谱库的构建与分析

4.1实验方法

4.1.1数据来源

4.1.2应用软件

4.1.3所建数据库的判别分析

4.1.4不同判别模式下肠球菌抗生素抗性指纹图库的构建

4.1.5指纹图谱库最适判别模式的验证方法

4.2结果与分析

4.2.1物种源模式下肠球菌抗生素抗性指纹图谱库的构建

4.2.2海湾模式下肠球菌抗生素抗性指纹图谱库的构建

4.2.3应用验证组合确定最适判别模式

4.3讨论

4.4结论

第5章抗生素抗性指纹图谱库准确性的影响因素分析

5.1实验方法

5.1.1数据来源

5.1.2分析方法

5.2结果与分析

5.2.1样本量对抗生素抗性指纹图谱库准确性影响

5.2.2抗生素种类对指纹图谱库准确性影响

5.3讨论

5.4结论

结论与展望

参考文献

攻读学位期间公开发表论文

致 谢

研究生履历