萘和镉对斑马鱼的联合毒性研究

摘要

萘和镉都是重要的海洋污染物。二者联合毒性作用的报道很少，而联合作用的研究更有助于客观地评价有毒物质在环境中的真实毒性。本论文以斑马鱼成鱼为实验材料，以超氧化物岐化酶(super oxide dismutase，SOD)作为氧化应激的分子指示物，以p53介导的凋亡通路相关基因的表达水平作为细胞损伤和修复的指标，研究了萘镉单独作用的毒性、萘镉同时作用和先后作用产生的联合毒性对斑马鱼氧化应激及细胞凋亡的影响，判断了萘镉联合毒性的作用方式及其机制。
　　 论文取得如下研究结果：
　　 1.SOD活性对萘暴露产生显著升高的时间比镉早2小时，推测SOD对萘的敏感性要大于镉。
　　 2.通过联合与单独处理组的对比，在暴露2-4小时内，联合作用的毒性表现为拮抗作用；4-24小时内，联合作用的毒性则表现为协同作用。
　　 3.短期萘暴露后再进行萘镉联合处理，其SOD酶活性在加入镉后第3到6小时与萘处理组相同，而与镉单独处理组差异显著，推测萘的预先处理使斑马鱼对毒性物质产生暂时的适应，从而使SOD对镉的敏感程度降低。
　　 4.含有不同剂量镉的两个联合处理组之间，SOD活性在第16小时出现显著差异，而两个不同剂量镉的单独处理组在24小时内没有发现这种现象，即联合毒使SOD酶活性对镉的不同浓度差异更加敏感。
　　 5.sod基因表达水平的检测结果显示，联合处理组的基因表达水平受到显著抑制，并且抑制的时间要比单独毒性处理组更长，说明联合毒性强于单独毒性。
　　 6.基因p53、bcl2和mdm2的表达水平在萘镉联合处理组中均发生显著下调，并且比萘和镉单独作用的抑制时间更长，且各个基因的表达水平之间无明显的关联，显示出了萘和镉毒性机理的复杂性。

目录

文摘

英文文摘

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引 言

第1章绪论

1.1联合毒性概述

1.1.1联合毒性的作用方式

1.1.2不同毒性物质间的联合毒性的研究现状

1.1.3萘镉联合毒性的研究

1.2斑马鱼及其在毒理学研究中的应用

1.2.1斑马鱼的特点及研究优势

1.2.2斑马鱼在毒理学研究中的应用

1.3生物大分子标记物在毒理学研究中的应用

1.3.1生物大分子标记物在毒理学研究中的优势

1.3.2蛋白分子标记物检测

1.3.3核酸分子标记物检测

1.4胁迫环境下p53介导的调控通路研究

1.4.1 bcl2基因

1.4.2 p53基因

1.4.3 mdm2基因

1.5本课题的目的和意义

第2章材料与方法

2.1实验试剂与设备

2.1.1实验试剂

2.1.2实验设备

2.2实验材料

2.3实验方法

2.3.1萘镉同时进行联合暴露的毒性实验

2.3.2短期萘处理后的萘镉联合暴露毒性实验

第3章实验结果与分析

3.1.萘镉同时联合暴露的毒性实验结果

3.1.1.镉单独处理组的SOD活性变化

3.1.2萘单独处理组SOD活性变化

3.1.3萘镉联合处理组SOD的活性变化

3.1.4结果讨论

3.2短期萘处理后的萘镉联合暴露实验对SOD活性的影响

3.2.1萘单独处理组与联合处理组的比较

3.2.2 1/4LC50镉剂量下联合处理组与单独处理组的比较

3.2.3 1/8LC50镉剂量联合处理组与单独处理组的比较

3.2.4萘提前暴露对不同镉剂量毒性的影响

3.3短期萘处理后的萘镉联合暴露毒性实验中sod及细胞凋亡相关基因表达水平的变化

3.3.1 RNA完整性的鉴定

3.3.2 Q-PCR最佳引物对确定

3.3.3 PCR反应效率测定

3.3.4 sod基因表达水平

3.3.5 p53基因表达水平

3.3.6 bcl2基因表达水平

3.3.7 mdm2基因表达水平

结 论

展 望

参考文献

攻读学位期间公开发表学术论文情况

致谢