以纳米粒子为佐剂的屋尘螨疫苗免疫治疗的实验研究

摘要

目的：建立屋尘螨哮喘动物模型，比较分别用屋尘螨粗浸液、重组Der P 2、包被rDer P2纳米粒子进行免疫治疗的疗效，为变态反应性疾病的免疫治疗提供新的思路。 方法：首先利用PLGA(聚乳酸-羟乙酸)制备包被重组Der P2的纳米粒子。其次，进行实验动物分组：近交系清洁级6～8周龄BALB／c小鼠40只，体重18～20克，随机分配为：A阴性对照组，B阳性对照组，C粗浸液治疗组(简称：粗浸液组)，DrDer P2治疗组(简称：rDer P2组)，E包裹rDer P2纳米粒子治疗组(简称：纳米粒子组)，每组8只，雌雄各半。哮喘模型建立及干预措施：第0、7、14天腹膜内注射(腹腔注射，i.P.)0.1mg／ml屋尘螨变应原粗浸液与10mg／ml AI(OH)<,3>生理盐水的混悬液100μ1；第28～30天对C、D、E组分别给予i.p.1mg／ml屋尘螨粗浸液100μl、lmg／ml rDer P2溶液100 μ1、lmg／ml包被rDer P2纳米粒子溶液100μ1进行治疗；第44～49天B、C、D、E组给予5mg／ml屋尘螨粗浸液100μ1鼻腔滴入(i.n.)方式激发，A组一直相应给予生理盐水处理；第51天处死各组动物。以酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法检测各组实验动物血清中IgE、IgGl、IgG2a的水平，以及支气管肺泡灌洗液(BALF)与脾细胞培养后上清液(SCCS)中细胞因子IL-4、IFN-γT及IL-10水平，并计数BALF中细胞总数与分类细胞数，制备肺组织病理切片以观察其病理改变，并选择视野用显微摄像仪拍照。 结果：添加铝佐剂的屋尘螨变应原致敏的小鼠在特异性变应原的连续激发下，肺组织产生明显的炎症反应，表现为BALF中细胞总数增加以及炎症细胞所占比例及绝对计数升高，且以分泌Th2型细胞因子如IL-4为主。血清IgE、IgGl水平升高。肺组织病理切片观察到支气管、细支气管上皮下和小血管周围有明显的炎性细胞浸润，以嗜酸性粒细胞为主，气道上皮结构紊乱，有部分脱落，部分可见粘液栓，上皮下充血水肿明显，肺泡间质增厚，也可见到炎性细胞浸润。给予相应免疫治疗后，肺组织炎症反应明显减轻，表现为BALF及SCCS中细胞总数减少，炎症细胞数减少，Th1型细胞因子如IFN-γ占主导；血清IgE、IgG1水平降低，IgG2a水平升高(以E组最高)；肺组织病理切片观察到细胞浸润程度明显减轻，气道结果基本恢复正常。 结论：本实验研究成功的建立了小鼠哮喘模型。用屋尘螨粗浸液及包被rDer p2的纳米粒子进行免疫治疗比用rDerp2进行免疫治疗的效果好；屋尘螨粗浸液与包被rDerp2的纳米粒子两者免疫治疗疗效没有明显差异。

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结论

参考文献

致谢

综述 蜂毒变应原及蜂毒过敏的免疫治疗