间接接触共培养下骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞及相关调控基因的时序表达

摘要

目的:应用新生大鼠心肌细胞(cardiomyocytes，CMs)与骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem colls,MSCs)体外间接接触共培养的方法模拟心肌内环境，研究模拟环境下MSCs向CMs的分化情况及相关调控基因的时序表达，筛选MSCs定向分化为心肌细胞的重要调控基因。 　方法:MSCs及CMs按1:5的比例进行体外间接接触共培养，连续观察两周，相差显微镜下观察MSCs形态变化，免疫荧光方法鉴定心肌特征性肌动蛋白α(α-actin)和肌钙蛋白T(cTnT)的表达，应用半定量RT-PCR分析TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4、MEF-2C、TEF-1等相关调控基因在分化过程中的时序表达。 　结果:共培养前MSCs呈成纤维细胞样，共培养后细胞形态发生变化，细胞体积增大，梭形形态逐渐变短变粗，近似棒状或椭圆形，细胞之间形成连接，排列方向趋于一致。MSCs共培养前及共培养1天、3天未见cTnT及α-actin阳性表达，共培养5天、7天、14天时cTnT阳性细胞百分率分别为7.14％、22.435、28.77％，α-actin阳性细胞百分率分别为9.205、22.88％、28.89％。TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4和MEF-2C基因在共培养后一天表达开始增强，共培养后七天达高峰，以后虽有所下降但仍维持在较高水平；TEF-1基因在诱导过程中表达无明显变化。 　结论:间接接触共培养条件下MSCs可分化为心肌样细胞；且在此过程中，TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4和MEF-2C基因可能是调控MSCs定向分化为心肌样细胞的重要调控基因。

目录

文摘

英文文摘

声明

第1章 引言

第2章 材料与方法

第3章 结果

第4章 讨论

第5章 结 论

致谢

参考文献

附录A实验照片

附录B中英文缩略词表

附录C综述：骨髓间充质干细胞诱导分化为心肌细胞及其相关机制的研究进展

攻读学位期间的研究成果