白藜芦醇对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞CD40-CD40L表达及基质金属蛋白酶-9活性的影响

摘要

目的：从细胞水平研究白藜芦醇(Resveratrol，Res)对体外TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)CD40-CD40L表达及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性的影响，并探讨白藜芦醇抗动脉硬化作用可能的分子机制。 方法：采用体外培养的人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)2-3代用于实验研究，HUVEC随机分6组： (1).空白对照组。 (2).TNF-α组(不同浓度、不同时间各4个亚组)： (3).白藜芦醇组。 (4).“不同浓度白藜芦醇+TNF-α”组(3个不同浓度亚组)。 (5).Res溶媒DMSO组。 (6).“抗CD40抗体+TNF-α”组。分别予TNF-α和白藜芦醇进行细胞干预后，显微镜下观察细胞大体形态的改变，用流式细胞术检测HUVEC表面CD40-CD40L分子的表达，用明胶酶谱法检测细胞培养上清液中MMP-9的表达活性，从细胞水平研究白藜芦醇对体外TNF-α诱导HUVEc的CD40-CD40L表达及MMP-9活性的影响，并探讨白藜芦醇抗动脉硬化作用可能的分子机制。 结果： (1).HUVEC经TNF-α刺激后，可见不同程度细胞损伤，表现为细胞坏死脱落，残余细胞形态肿胀、排列稀疏，呈时间和浓度相关性。而经白黎芦醇预孵育的HUVEC只有少量细胞坏死脱落，残余细胞形态良好，排列规整。可见白黎芦醇对TNF-α损伤的HUVEC具有保护作用。 (2).经不同浓度TNF-α(1μg/L，10 μg/L)组均刺激24h后及不同时间(12h，24h)组的TNF-α(均10μg/L)作用后，流式细胞术检测HUVEC表达CD40-CD40L平均荧光强度，均较对照组HUVEC明显升高(P＜0.05和P＜0.01)。TNF-α刺激HUVEC上CD40-CD40L的表达在一定范围呈时间(0 h，1 h，12 h，24 h)和浓度(0 μg/L，0.1μ g/L，1μg/L，10μg/L)依赖性。 (3).给与1μ mol/L和10μ mol/L浓度的白黎芦醇预孵育的HUVEC，在经过TNF—α刺激后，其表面CD40及CD40L分子的表达明显少于单用TNF-α刺激(TNF-α组)时的表达(P＜0.01)。而单用白黎芦醇组或DMSO组对HUVEC表面CD40及CD40L分子的表达较对照组无明显改变(P＞0.05)。白黎芦醇在0.1 μmol/L，1μ mol/L，10 pμmol/L范围内可呈浓度依赖性的抑CD40-CD40L的表达。 (4).在TNF—α组经过TNF—α刺激后，明胶酶谱法检测HUVEC培养液中MMP-9的表达活性较对照组HUVEC明显升高(P＜0.01)，而在“抗CD40抗体+TNF-α”组，预先加入抗CD40抗体后再加入TNF-α刺激，HUVEC培养液中MMP-9的表达活性较单用TNF—α组HUVEC明显下降(P＜0.01)，表明通过CD40-CD40L信号作用途径，TNF-α可增加HUVEC培养液中MMP-9的表达活性，并为抗CD40抗体所拮抗。 (5).在“不同浓度白藜芦醇+TNF—α”组，经不同浓度白黎芦醇(1 μmol/L和10μmol/L)预孵育的HUVEC，在经过TNF—α刺激后，其HUVEC培养液中MMP-9的表达活性较单用TNF—α刺激时明显下降(P＜0.01)，白黎芦醇在0.1μmol/L，1μ mol/L，10μmol/L范围内可呈浓度依赖性的抑制TNF-α诱导MMP-9的表达活性，表明白黎芦醇可抑制TNF-α经由CD40-CD40L信号作用途径诱导上调MMP-9表达活性。 结论： (1).TNF-α可诱导HUVEC表面CD40-CD40L分子表达增加，并在一定范围内呈时间和浓度依赖性。 (2).TNF-α可通过CD40-CD40L信号作用途径增加HUVEC培养液中MMP-9的表达活性，并被抗CD40抗体所拮抗。 (3).白藜芦醇可减少TNF-α诱导上调的HUVEC表面CD40-CD40L的表达，并可抑制TNF-α通过CD40-CD40L信号作用途径上调的HUVEC MMP-9的表达活性，在一定范围内呈浓度依赖性，可被看作是CD40-CD40L信号途径的特异性抑制剂。 (4).白藜芦醇可减轻TNF—α对HUVEC的损伤作用，对HUVEC有保护作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：中英文简写对照

声明

第1章引言

第2章材料与方法

第3章结果

第4章讨论

第5章结论

致谢

参考文献

附录：各组人脐静脉内皮细胞图像

综述 白藜芦醇的心血管药理作用研究进展

在读学位期间的研究成果