表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤促进创面愈合的实验研究

摘要

目的： 采用表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤并移植修复兔全层皮肤缺损创面，观察创面修复效果和局部皮肤组织白介素10与肿瘤坏死因子-α的表达变化。 方法： （1）取因创伤等原因致意外流产的的妊娠24～26周龄胎儿皮肤标本，用胰蛋白酶和EDTA联合消化法分离表皮，用Ⅳ型胶原快速粘附法分离纯化人表皮干细胞，以含表皮生长因子、角质细胞无血清培养液等组成的表皮干细胞培养基进行体外培养，测定克隆形成率。（2）制备脱细胞真皮将体外培养的人表皮干细胞接种到脱细胞真皮支架中，构建组织工程人工皮肤。（3）取新西兰白兔常规制作背部全层皮肤缺损创面随机分为四组，A组用含表皮干细胞的组织工程皮肤移植于皮肤缺损创面；B组用含角质细胞的组织工程皮肤移植于皮肤缺损创面；C组用单纯脱细胞真皮移植于皮肤缺损创面；D组用创面空置为对照。观察创面修复情况，局部炎症反应，创面愈合时间。各组分别于术后在部分创面取材行常规HE染色和IL-10、TNF-α免疫组织化学染色观察。 结果： 体外培养的人表皮干细胞增殖稳定，克隆形成率明显高于角质细胞对照组。制备脱细胞真皮柔软有韧性，HE染色显示已去除表皮，真皮内未见细胞及碎屑存在，胶原排列规则。表皮干细胞接种于脱细胞真皮后增殖良好，HE染色可见较多的细胞分布于真皮支架中。含表皮干细胞的人工皮肤移植后创面愈合良好，局部炎症反应轻微，无出血、积脓、坏死，创面愈合时间较角质细胞对照组明显缩短。IL-10免疫组化染色显示四组均有表达，其中A组表达最强，B组表达次之，C组和D组表达最弱。TNF-α免疫组化染色：四组均有表达，其中B组表达最强，A组表达次之，C组及D组表达较弱。 结论： 以表皮干细胞作为种子细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤可用有效促进皮肤缺损创面的修复治疗。

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文摘

英文文摘

论文说明:英文缩写词表

声明

第一章前言

第二章材料与方法

第三章结果

第四章讨论

第五章结论

致谢

参考文献

综述干细胞、真皮支架材料与创面修复

攻读学位期间的研究成果