多西紫杉醇联合得力生对肺腺癌细胞株A549细胞生长的影响及其机制的体外研究

摘要

目的： 探讨多西紫杉醇、中成药得力生及两药联合对肺癌细胞株A549细胞生长、基因表达的影响及其机制和相互作用形式。 方法： 采用MTT法测定细胞增殖抑制率，在显微镜下观察细胞凋亡的形态特点，应用流式细胞仪检测细胞凋亡率，采用逆转录聚合酶联反应（RT-PCR）法测定凋亡相关基因、转移相关基因及促血管新生基因mRNA的表达变化。 结果： （1）得力生、多西紫杉醇及两药联合作用48小时后，A549细胞存活率均明显降低，与对照组相比，差异有统计意义（P均<0.05）；得力生与多西紫杉醇联合处理A549细胞，其作用强度大于任何一种单药（P均<0.05），两药间相互作用形式表现为相加作用，甚至为协同作用。（2）多西紫杉醇联合得力生作用A549细胞24小时后亦可见典型的凋亡形态学改变。进一步的流式检测结果表明：得力生与多西紫杉醇联合处理后，其对A549细胞早期凋亡与得力生、多西紫杉醇单药作用强度相当，但其对A549细胞晚期凋亡的影响大于任何一种单药（P均<0.05）。（3）RT-PCR结果显示，得力生单药作用于A549细胞24小时后，survivin、β1整合素亚基基因的mRNA表达明显降低，与对照组相比，差异有统计意义（P均<0.05）；但α5整合素亚基、VEGF和bFGF基因的mRNA表达无明显下降，与对照组相比，差异无统计意义（P>0.05）。（4）多西紫杉醇单药作用于A549细胞24小时后，α5整合素亚基基因、bcl2/bax基因表达比例明显降低，与对照组相比，差异有统计意义P均<0.05）；但VEGF、bFGF、β1整合素亚基基因的mRNA与对照组相比表达无明显下降，差异无统计意义（P>0.05）。（5）得力生与多西紫杉醇联合处理后，其对A549细胞survivin、β1整合素亚基、α5整合素亚基基因表达和bcl2/bax基因表达比例均有明显抑制作用（P均<0.05），但对VEGF、bFGF基因表达无影响（P>0.05）。进一步研究显示，得力生与多西紫杉醇联合作用后，对A549细胞survivin、β1整合素亚基基因mRNA表达的影响与得力生单药相比，差异无统计学意义。多西紫杉醇与得力生联合作用后，对A549细胞α5整合素亚基基因、bcl-2/bax比值的影响与多西紫杉醇单药相比，差异无统计学意义。即在基因水平上两药间相互作用形式为：两种单药互不干扰，均能发挥各自对某些基因表达的抑制作用，且具有互补性。 结论： 多西紫杉醇联合得力生可明显抑制A549细胞增殖，诱导A549细胞凋亡，且与任一单药相比，两药联合作用增强，两药间相互作用形式为相加作用，甚至为协同作用。其内在作用机制可能通过抑制bcl-2/bax、survivin、α5整合素亚基、β1整合素亚基表达而发挥作用。

目录

文摘

英文文摘

声明

第1章 引言

第2章 材料与方法

2.1 主要试剂

2.2 主要仪器

2.3 实验细胞

2.4 实验方法

2.4.1 实验分组

2.4.2 细胞培养

2.4.3 细胞形态学观察

2.4.4 A549细胞增殖抑制率检测(MTT)

2.4.5 药物间相互作用形式的分析方法

2.4.6 细胞凋亡率测定

2.4.7 RT-PCR 方法检测A549细胞凋亡相关基因、促血管新生基因及整合素亚基基因mRNA表达水平

2.4.8 统计学分析

第3章 结果

3.1 多西紫杉醇、得力生、得力生联合多西紫杉醇对A549细胞增殖的影响

3.2 A549细胞形态学

3.3 多西紫杉醇、得力生、得力生联合多西紫杉醇对A549细胞凋亡的影响

3.4 多西紫杉醇、得力生、得力生联合多西紫杉醇对A549细胞基因表达的影响

第4章 讨论

4.1多西紫杉醇、得力生及两者联合对 A549细胞生长的影响

4.2多西紫杉醇、得力生及两者联合对 A549细胞凋亡的影响

4.3多西紫杉醇、得力生及两者联合对A549细胞基因表达的影响

4.3.1 凋亡相关基因

4.3.2 整合素

4.3.3 血管新生因子

第5章 结论与展望

致谢

参考文献

综述一 整合素与肿瘤的关系

综述二 RNA干扰逆转肺癌的多药耐药性研究进展

攻读硕士学位期间的研究成果