人外周血平滑肌祖细胞与成熟血管平滑肌细胞生物学特性比较

摘要

目的:探讨成人外周血来源的平滑肌祖细胞(smooth muscle progenitorcells,SPCs)与成熟血管平滑肌细胞(smooth muscle cells,SMCs)细胞形态、增殖潜能等方面的异同点,为血管组织工程提供可靠的种子细胞来源。
　　 方法:1、密度梯度离心法分离成人外周血中单个核细胞,于用纤粘连蛋白包被的含血小板衍生生长因子BB(Platelet derived growth factorBB,PDGF-BB)和EGM-2培养基的培养瓶中诱导培养,观察细胞形态变化,常规换液、传代、冻存及复苏。
　　 2、通过手术取得实验用大隐静脉3cm,采用胶原蛋白酶消化、差异贴壁法原代培养,含PDGF-BB的EGM-2培养基培养,观察细胞形态,获得平滑肌细胞。
　　 3、平滑肌祖细胞及平滑肌细胞分别进行细胞爬片,应用细胞免疫荧光检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和调宁蛋白(calponin1)的表达。
　　 4、用RT-PCR检测平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,a-sma)和调宁蛋白(calponin1,cap)的mRNA表达。
　　 5、MTT(四唑盐比色实验)分别检测第6代平滑肌祖细胞与平滑肌细胞的增殖能力。
　　 结果:1、SPCs传代细胞培养达80-90％融合时,呈螺旋状排列,并可呈典型“峰、谷”样形态,符合平滑肌细胞形态学特征。
　　 2、平滑肌祖细胞可表达平滑肌细胞特异性标记α-SMA和calponin1。
　　 3、第6代的SPCs(n=10,A=0.43±0.02)增殖能力明显强于第6代的SMCs(n=10,A=0.21±0.02,P<0.01)。
　　 结论:1、外周血中单个核细胞在PDGF-BB的刺激下可以分化为具有平滑肌细胞特性的平滑肌祖细胞。
　　 2、平滑肌祖细胞较平滑肌细胞增殖旺盛,培养3个月未见老化,具有发展为一种理想的血管组织工程种子细胞来源的可能性。