血脂康对胰岛素、血管紧张素Ⅱ诱导血管内皮细胞VCAM-1、ICAM-1表达的影响

摘要

目的:
　　 用胰岛素(insulin)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血脂康体外刺激培养人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),通过观察细胞形态、增殖能力,粘附分子VCAM-1、ICAM-1 mRNA及蛋白表达水平,探讨胰岛素、AngⅡ的促进AS作用机制和血脂康的抑制AS作用及可能的作用机制。
　　 方法:
　　 在体外培养HUVECs,2～3代用于实验。分成八组:正常对照组、血脂康组(150μg/ml)、胰岛素组(100nmol/ml)、AngⅡ组(5×10-8mol/ml)、AngⅡ+胰岛素组、胰岛素+血脂康组、AngⅡ+血脂康组、AngⅡ+胰岛素+血脂康组。血脂康各组,预先用血脂康孵育2h,然后加AngⅡ或/和胰岛素共同孵育。①通过显微镜及MTT比色法观察药物对HUVECs作用24、48、72h细胞形态学、增殖能力的影响；②通过半定量RT-PCR和Wester-blot检测刺激培养24h HUVECsICAM-1、VCAM-1 mRNA和蛋白表达水平。
　　 结果:
　　 ①外源性加入血脂康后分别作用24、48、72h,同对照组相比,细胞形态和活性无明显变化,说明血脂康药物本身对细胞没有毒性。而胰岛素、AngⅡ作用于细胞后发现内皮细胞贴壁时间延迟,部分细胞与周围细胞脱离接触,细胞胞体缩窄变长,细胞质密度增加,核质浓缩,细胞数量减少,尤其胰岛素+AngⅡ组。说明胰岛素、AngⅡ对细胞有毒性,且两者具有协同作用。
　　 ②与对照组相比,胰岛素、AngⅡ刺激24h后内皮细胞ICAM-1、VCAM-1mRNA和蛋白的表达显著升高(P<0.05),且胰岛素+AngⅡ组ICAM-1、VCAM-1mRNA和蛋白水平显著高于胰岛素或AngⅡ单独刺激组(P<0.05),提示胰岛素和AngⅡ诱导内皮细胞ICAM-1、VCAM-1 mRNA和蛋白的表达且有协同作用,而胰岛素+血脂康、AngⅡ+血脂康、胰岛素+AngⅡ+血脂康与对应未加血脂康各组相比,内皮细胞ICAM-1、VCAM-1 mRNA和蛋白的表达明显降低(P<0.05),提示血脂康在一定程度上有抑制胰岛素、AngⅡ诱导内皮细胞ICAM-1、VCAM-1mRNA和蛋白的表达,而单用血脂康组与对照组相比,ICAM-1、VCAM-1 mRNA和蛋白水平无明显改变(P>0.05),表明血脂康对正常内皮细胞无明显影响。
　　 结论:
　　 胰岛素、血管紧张素Ⅱ能导致细胞形态学改变,增殖能力降低,促进血管内皮细胞ICAM-1和VCAM-1的mRNA及蛋白表达,且两者具有协同作用；而血脂康本身对内皮细胞没有毒性作用,且在一定程度上可抑制高胰岛素、血管紧张素Ⅱ诱导的内皮细胞ICAM-1、VCAM-1的mRNA及蛋白表达上调；改善胰岛素、AngⅡ对HUVECs抑制作用,为研究胰岛素抵抗、血管紧张素Ⅱ参与动脉粥样硬化(AS)及他汀类调脂外的抗AS作用提供实验依据。