大蒜素诱导卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP凋亡机制研究

摘要

目的：
　　 研究大蒜素作用于卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP后P53、Bax、Bcl-2等凋亡相关基因表达变化，探索大蒜素诱导肿瘤细胞凋亡的机制。
　　 方法：
　　 将SKOV-3/DDP细胞随机分为对照组、大蒜素组、顺铂组和大蒜素+顺铂组；大蒜素组仅加入浓度为40ug/ml的大蒜素，顺铂组加入浓度为40ug/ml的顺铂，大蒜素+顺铂组加入大蒜素和顺铂各40ug/ml，各组分别培养24h、48h。用MTT法测定各组细胞增殖抑制率，利用金氏公式计算两药的合用指数(q)分析两药联合应用的效果：q=E(AB)/[EA+(1-EA)×EB]，其中E(AB)为两药合用的抑制率，EA和EB为各药单用时的抑制率，q=0.85～1.15表示两药作用相加；q>1.15表示两药作用协同；q<0.85表示两药作用拮抗[1]。RT-PCR方法观察各组基因P53、Bax、Bcl-2mRNA的表达，Western blot法观察各组P53、Bax、Bcl-2蛋白表达变化。
　　 结果：
　　 1、大蒜素组、顺铂组、大蒜素+顺铂组对SKOV-3/DDP细胞生长均有抑制作用，与空白对照组相比有统计学意义(P<0.05)，大蒜素组抑制率高于顺铂组(P<0.05)，大蒜素+顺铂组培养24h后对SKOV-3/DDP细胞抑制率高于其各自单用时对SKOV-3/DDP细胞的抑制率(P<0.05)，大蒜素+顺铂组培养48h后对SKOV-3/DDP细胞抑制率高于顺铂组对SKOV-3/DDP细胞的抑制率(P<0.05)，但与大蒜素组对SKOV-3/DDP细胞的抑制率间无统计学意义。其中大蒜素组、大蒜素+顺铂组对SKOV-3/DDP细胞的抑制率呈时间依赖性。大蒜素+顺铂组作用于SKOV-3/DDP细胞24小时后，合用指数分别为1.16；48小时后合用指数分别为0.85；根据金氏公式可以推测，两药合用24小时后的作用效果表现为协同作用；两药合用48小时后的作用效果表现为相加作用。
　　 2、顺铂组促凋亡基因P53 mRNA及蛋白的表达与空白对照组相比无统计学意义(P>0.05)，大蒜素组、大蒜素+顺铂组促凋亡基因P53 mRNA及蛋白的表达高于顺铂组、空白对照组(P<0.05)，大蒜素+顺铂组促凋亡基因P53 mRNA及蛋白的表达与大蒜素组间无统计学意义(P>0.05)。
　　 3、大蒜素组、顺铂组、大蒜素+顺铂组促凋亡基因Bax mRNA及蛋白表达较空白对照组明显增加(P<0.05)，大蒜素组Bax mRNA及蛋白表达高于顺铂组(P<0.05)，大蒜素+顺铂组对Bax mRNA及蛋白表达高于其各自单用时Bax mRNA及蛋白表达(P<0.05)。
　　 4、顺铂组抑凋亡基因Bcl-2mRNA及蛋白的表达与空白对照组相比无统计学意义(P>0.05)，大蒜素组、大蒜素+顺铂组Bcl-2mRNA及蛋白表达量较顺铂组、空白对照组明显降低(P<0.05)，大蒜素+顺铂组Bax mRNA及蛋白表达低于大蒜素组(P<0.05)。
　　 结论：
　　 1、大蒜素对SKOV-3/DDP细胞生长有抑制作用，呈时间-效应关系。大蒜素对SKOV-3/DDP的抑制作用强于顺铂。大蒜素和顺铂间有协同/相加作用。
　　 2、大蒜素作用于SKOV-3/DDP细胞后，促凋亡基因P53、Bax mRNA及蛋白的表达增高，而抑凋亡基因Bcl-2mRNA及蛋白的表达降低，且优于顺铂。大蒜素与顺铂联合作用SKOV-3/DDP后促凋亡基因P53、Bax mRNA及蛋白的表达增高，和抑凋亡基因Bcl-2mRNA及蛋白的表达降低较各自单用组明显。
　　 3、大蒜素组促凋亡基因P53mRNA和蛋白表达量增多，伴随着促凋亡基因Bax mRNA和蛋白有显著性增高。表明大蒜素诱导细胞凋亡机制可能是先诱导P53 mRNA和蛋白表达，通过P53基因进一步诱导Bax mRNA和蛋白表达，发挥连锁凋亡激活效应。
　　 4、大蒜素组Bax蛋白显著性增高，同时伴Bcl-2蛋白表达量减低，表明大蒜素诱导细胞凋亡机制可能是通过升高Bax蛋白，下调Bcl-2蛋白，从而促进SKOV-3/DDP细胞凋亡。
　　 总之，大蒜素对SKOV-3/DDP细胞生长有抑制作用，诱导SKOV-3/DDP细胞凋亡可能与促进P53、Bax的表达增高、Bcl-2的表达降低有关。