低氧对人肺腺癌A549细胞球上皮-间质转化促转移影响

摘要

肺癌是我国最常见的恶性肿瘤之一。其恶性程度高，转移发生早，对放化疗敏感性较差，死亡率居高不下，其中转移是肺癌患者死亡的主要原因之一。
　　 近年来提出的肿瘤干细胞(cancer stem cells，CSC)学说及其的研究进展，为人们认识肿瘤的发生、发展、转移及复发提供了一个全新的视野。根据肿瘤干细胞在肿瘤转移过程中所起的决定作用，有学者进一步提出了转移肿瘤干细胞(migrating cancer stem cells，MCSC)的概念。在绝大多数实体瘤内存在低氧微环境，已有研究报道低氧对肿瘤转移起促进作用；然而，目前对于CSC在低氧环境下转移能力相关特征，尚缺乏相关的研究。
　　 本实验旨在观察在低氧微环境因素刺激下对具有干细胞特性的A549细胞球通过上皮-间质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)机制促进肺癌转移的影响。
　　 目的：探讨低氧对人肺腺癌A549细胞来源A549细胞球EMT促进肺癌转移机制的影响。
　　 方法：采用肿瘤干细胞无血清培养基(serum-free medium，SFM)的方法培养A549细胞，诱导A549细胞球体形成；随后将A549细胞和A549细胞球体在低氧环境下培养24h，分别检测2种细胞中EMT标志物上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平，并与它们在常氧条件下的表达情况进行比较。
　　 结果：(1)免疫荧光：在常氧和低氧条件下，A549细胞E-cadherin蛋白较A549细胞球表达强；常氧A549细胞球相对荧光强度为5.20±1.72，低氧A549细胞球为0；而Vimentin表达与E-cadherin结果相反，常氧A549细胞球Vimentin相对荧光强度为7.05±1.52，低氧A549细胞球为19.63±1.25。两两比较均具有显著统计学意义(P<0.01)。(2)RT-PCR：在常氧和低氧条件下，A549细胞E-cadherin的mRNA较A549细胞球表达强；常氧A549细胞球mRNA相对表达量为175±8.2，低氧A549细胞球为72±6.5；而Vimentin表达与E-cadherin结果相反，常氧A549细胞球Vimemin的mRNA相对表达量为244±8.1，低氧A549细胞球为307±5.1。两两比较均具有显著统计学意义(P<0.01)。(3)Western-blot：在常氧和低氧条件下，A549细胞E-cadherin蛋白较A549细胞球表达强；常氧A549细胞球蛋白相对表达强度为136±5.0，低氧A549细胞球为36±4.6；而Vimentin表达与E-cadherin结果相反，常氧A549细胞球Vimentin蛋白相对表达量为189±8.1，低氧A549细胞球为222±8.7。两两比较均具有显著统计学意义(P<0.01)。
　　 结论：A549细胞球体比A549细胞具有更强的转移能力，低氧条件下A549细胞球体比常氧条件下的A549细胞球体具有更强的转移能力。