雷帕霉素联合环孢素A对免疫介导再生障碍性贫血小鼠造血功能的影响

摘要

目的：
　　 研究雷帕霉素(RAPA)联合环孢菌素A(CsA)对免疫介导性再生障碍性贫血模型小鼠骨髓造血功能的影响，为再生障碍性贫血寻求新的免疫抑制治疗策略。
　　 方法：
　　 X射线亚致死量(6Gy)全身均匀照射昆明小鼠，在照射后的4小时内，给己照射的昆明小鼠尾静脉注射来自于Balb/c小鼠的胸腺淋巴结悬液，每只昆明小鼠输入的淋巴细胞为106个，从而成功建立了再生障碍性贫血小鼠模型。把成功建立的再生障碍性贫血小鼠模型分为下列几组：(1)RAPA联合CsA：A组：同时给予RAPA(0.1mg/kg/d)和CsA(5 mg/kg/d)，腹腔注射×5天；B组：同时给予RAPA(0.5 mg/kg/d)和CsA(5 mg/kg/d)，腹腔注射×5天；C组：同时给予RAPA(1mg/kg/d)和CsA(5 mg/kg/d)，腹腔注射×5天；(2)RAPA组：单独给予RAPA(1mg/kg/d)，腹腔注射×5天；(3)AA组：免疫介导再生障碍性贫血小鼠模型，不给予任何处理；(4)CsA组：单独给予CsA(5 mg/kg/d)，腹腔注射×5天；(5)对照组：为正常昆明小鼠不给予任何处理。在造模后的不同时间点观察各组小鼠的一般状况，外周血白细胞、血小板等计数，小鼠股骨骨髓粒巨噬细胞集落单位数、有核细胞数及濒死时取股骨行病理切片，做HE染色，观察骨髓增生情况。用来源于各组小鼠脾脏的淋巴细胞行流式细胞检测，测定其CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+CD25+细胞的表达。
　　 结果：
　　 1.AA组小鼠外周血白细胞、血小板数量在造模后开始降低，第8-14天降至最低(WBC0.42×109/L，PLT3.50×109/L)，14天生存率为0％。骨髓增生极度低下，有核细胞明显减少，脂肪细胞增多，脾淋巴细胞流式细胞检测CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD4+明显升高(CD3+86.85％CD3+CD8+53.48％，CD3+CD4+63.14％)，CD4+CD25+细胞降低(CD4+CD25+24.30％)。
　　 2.与AA组相比较，给药组中RAPA联合CsA组中的B组和C组在小鼠模型建立成功后14天，外周血细胞数开始持续上升。双侧股骨骨髓粒巨噬细胞集落单位数和有核细胞数显著增多(分别为A组：8.42×106/个股骨，50.20个集落数；C组：7.79x106/个股骨，48.20个集落数)。骨髓病理HE染色切片发现，有核细胞数剧增，造血功能明显改善。用流式细胞仪对脾脏淋巴细胞进行检测发现，CD3+CD4+和CD3+CD8+细胞的表达显著低于AA组，且与对照组无统计学差异(B组：p=1.00，C组：p=0.672，>0.05)。
　　 3.各组小鼠脾脏CD4+CD25+T细胞表达中，RAPA联合CsA(C组)、单纯RAPA组较AA组明显升高，且与对照组无明显差异(C组：p=0.29，RAPA组：p=0.995，>0.05)。CD4+CD25+的表达与RAPA给药剂量呈剂量依赖性。
　　 结论：
　　 1.X射线亚致死量(6Gy)全身均匀照射雌性昆明小鼠(受体)。在照射后4小时内，将雌性Balb/c小鼠(供体)胸腺淋巴结悬液经尾静脉注射入受体体内(1×106淋巴细胞/只)，成功建立了再生障碍性贫血小鼠模型。
　　 2.RAPA具较强的免疫抑制疗效，与CsA联合应用两者能协同作用于免疫介导再生障碍性贫血小鼠T细胞活性的抑制，且对免疫介导AA小鼠免疫调节紊乱有纠正作用，改善其造血功能，可作为一种AA治疗的新策略。
　　 3.RAPA可刺激免疫介导AA小鼠体内CD4+CD25+细胞增殖。