细胞转动肽R8和Sec修饰纳米粒用于蛋白多肽口服给药的研究

摘要

本项目采用三种细胞转运肽--R8、非经典分泌肽Sec和Sec-R8对纳米粒进行修饰，提高载药纳米粒在肠道壁细胞中的跨胞转运效率，从而促进多肽与蛋白质在消化道内的吸收。本文用Fmoc固相合成法人工合成细胞转运肽R8、Sec和Sec-R8，用葡聚糖凝胶SephadexG-25凝胶过滤层析进行分离纯化，再用高效液相色谱法和质谱鉴定确定目标肽；选用荧光标记的水溶性药物葡聚糖为模型药物，用PLGA为载体材料复乳法制备PLGA纳米粒，运用单因素考察和正交设计优化纳米粒的最佳处方，再用三种转运肽分别修饰纳米粒；取大鼠空肠做体外肠粘膜转运实验，实验所加的样品分别为游离药物FD4-葡聚糖、载药纳米粒和细胞穿透肽修饰的载药纳米粒(两种修饰方法，方法一，先制备纳米粒，再连接转运肽；方法二，先合成PLGA-CPP偶联化合物，再制备纳米粒)，用荧光分光光度法测透过药物浓度，计算表观渗透系数(Papp)，比较游离药物、载药纳米粒、穿透肽修饰纳米粒的转运效果。
　　 本实验中纯化后的三种目标肽纯度均达到了95％以上，符合实验要求。按优化条件药物浓度1mg/ml，PLGA浓度4％，PVA浓度1％，超声功率150W，制得分布均匀、形态圆整、平均粒径203nm，包封率68.5％，Zeta值-9.513mV(n=3)的载药纳米粒。通过6小时的大鼠肠道通透实验可以得出：与游离药物相比，用载药纳米粒在肠道粘膜上的表观渗透系数(Papp)可从3.3×10-6cm/s提高到20.0×10-6cm/s，累积渗透量可增加5倍，表现了纳米粒可提高药物的肠道粘膜转运上的优势；与未修饰载药纳米粒相比，穿透肽R8和Sec修饰的纳米粒在肠粘膜上的药物渗透量最大值从68.37ng增加到175.83ng，表观渗透系数最大值从20.0×10-6cm/s增加到51.4×10-6cm/s，表明转运肽修饰的纳米粒属于吸收较好的药物体系。