肉桂醛对高糖环境下大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原蛋白分泌的影响和机制

摘要

目的：心肌间质纤维化作为多种心脏疾病发展到终末期的主要病理结构变化之一，主要表现为心肌成纤维细胞增生肥大和细胞外基质胶原蛋白过度沉积。细胞外信号传导通路的（ERK1/2）的磷酸化蛋白活性，与心肌肥厚和纤维环关系密切。肉桂醛是肉桂里提炼出来的中药成分，其药用价值较为广泛，有明显的抗糖尿病高血糖效应。也有研究表明肉桂醛可以明显逆转高血糖诱导的肾间质纤维化，并且ERK1/2信号通路在其中发挥了重要作用，但有关肉桂醛对心肌纤维化预防和治疗作用尚未见报道。
　　方法：使用高糖作为刺激因素，体外培养SD乳鼠心肌成纤维细胞(CFs)，诱导心肌成纤维细胞增殖及Ⅰ型和Ⅲ型间质胶原蛋白合成、分泌，用肉桂醛干预高糖的诱导效应。MTT法检测高糖环境下及肉桂醛干预后细胞增殖变化，ELISA检测细胞上清液中Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白含量，RT-PCR法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达变化，WesternBlot法检测高糖刺激后及肉桂醛干预后ERK1/2及p-ERK1/2的蛋白表达变化。
　　结果：⑴与对照组比较，高糖组细胞有明显增殖变化，Ⅰ型和Ⅲ胶原蛋白mRNA及蛋白的表达也明显增加（P＜0.05）。⑵与高糖组比较，肉桂醛组细胞增殖及Ⅰ型和Ⅲ胶原蛋白mRNA及蛋白表达量明显受抑制(P＜0.05)，且呈现一定浓度及时间依赖性，其产生的作用效果与ERK1/2抑制剂PD98059组的作用效果很相似。⑶与高糖组相比，肉桂醛组及抑制剂PD98059组的磷酸化ERK1/2蛋白活性均更低，且效果相似，说明高糖是通过ERK1/2信号通路中的磷酸化活性发挥作用，而且可能肉桂醛对高糖的效应的负性调节作用，是通过抑制ERK1/2信号通路蛋白的磷酸化活性表达有关（P＜0.05)。
　　结论：①高糖对心肌成纤维细胞增殖和Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的合成和分泌起到促进作用。②肉桂醛可减轻高糖诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖，抑制细胞间质胶原蛋白合成和分泌。③肉桂醛可能通过下调ERK通路中相关分子的蛋白活性表达而发挥抗高糖效应。

目录

声明

摘要

中英缩略词表

第1章 引言

第2章 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 实验动物

2．1．2 主要试剂

2．1．3 主要仪器

2．2 实验方法

2．2．1 器材的灭菌、去RNA酶处理

2．2．2 相关液体的配置

2．2．3 乳鼠心肌成纤维细胞的培养及鉴定

2．2．4 实验分组

2．2．5 MTT法检测高糖及肉桂醛培养心肌成纤维细胞的增殖情况

2．2．6 ELISA法检测培养细胞上清中Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白的含量

2．2．7 心肌成纤维细胞总RNA提取及检测总RNA的浓度及纯度

2．2．8 RT-PCR法检测各组细胞中ColⅠ、ColⅢ表达

2．2．9 心肌成纤维细胞总蛋白的提取及蛋白浓度的测定

2．2．10 Western blot法检测心肌成纤维细胞的ERK1／2通路蛋白的表达

2．2．11 统计学处理

第3章 结果

3．1 乳鼠心肌成纤维细胞的生长特点及免疫鉴定结果

3．1．1 倒置显微镜观察

3．1．2 免疫组织化学检测波形蛋白的表达

3．2 MTT检测高糖及肉桂醛对心肌成纤维细胞增殖的影响

3．3 ELISA检测细胞上清液中ColⅠ及ColⅢ含量

3．4 RT-PCR法检测各组心肌成纤维细胞ColⅠ、ColⅢ的mRNA的衰达

3．5 Western blot法检测ERK1／2通路蛋白的表达·

第4章 讨论

4．1 肉桂醛对高糖刺激的心肌成纤维细胞增殖的影响

4．2 肉桂醛对高糖刺激的心肌成纤维细胞分泌的Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白合成和分泌的影响

4．3 肉桂醛与ERK1／2通路的关系

第5章 结论与展望

5．1 结论

5．2 展望

致谢

参考文献

综述 糖尿病心肌病和ERK1／2的关系