萍乡红鲫卵母细胞发育及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在其中的表达和定位

摘要

本文采用组织学和免疫组织化学的方法研究了萍乡红鲫早期性腺发育和丝裂原活化激酶(MAPK)在卵母细胞中的表达和定位，为鱼类性腺发育研究和养殖生产提供了理论研究，研究结果如下:
　　 萍乡红鲫早期性腺发育组织学观察表明:在早期性腺发育时期过程中，原始生殖细胞(PGCs)沿着肠系膜背侧进行迁移，不断地进行增殖发育，最后聚集到生殖嵴上（靠近肠管和肾管），形成原始性腺。在出膜前期，首次观察到靠近肠系膜背侧和卵黄囊的PGC，细胞大且透亮，染色浅，卵黄囊为细胞提供营养物质，5日龄时PGCs迁移到生殖嵴上，形成原始性腺，卵黄囊被完全吸收，50日龄的稚鱼开始出现了组织学分化，原始性腺形成卵巢。
　　 萍乡红鲫卵母细胞发育形态观察结果:根据细胞的大小和形态特征、核质比大小、核仁数目、嗜酸碱性、滤泡膜的组成和变化等特征，萍乡红鲫卵母细胞可分为6个时相1～6。第1时相卵母细胞:卵原细胞成簇排列，呈圆形或卵圆形，细胞核占细胞的绝大部分;细胞大小为:15.77um～32.77um。第2时相卵母细胞:呈圆形、椭圆形和多角形的圆形，体积变大，核仁数目增多，产卵板形成，细胞呈嗜碱性，细胞大小为69.40um～119.92um。第3时相卵母细胞:呈圆形或卵圆形，出现液泡和放射带，液泡形态由小到大，数量由少到多，充满着细胞质，双层滤泡膜，呈弱嗜酸性，晚期出现卵黄颗粒，细胞大小为68.63um～372.73um。第4时相卵母细胞:卵黄颗粒逐渐充满了卵母细胞，晚期卵母颗粒数量增多且融合成块状，细胞核体积越来越小，并向动物极移动，油滴由小聚合成为大油滴，放射纹明显。细胞大小为317.2um～1003.06um。第5时相卵母细胞:细胞核消失只留下类似细胞核状的核区，核膜消失，核仁消失。这个时期的卵母细胞为成熟的卵子等待受精。大小为卵母细胞时期最大的为:1043.28um～1144.23um。第6时相卵母细胞:为退化的卵母细胞，组织学观察卵巢中有大量正在消化吸收的卵母细胞和消化后的卵母细胞，还有一些2、3、4时相的卵母细胞
　　 MAPK免疫组织化学结果:MAPK在萍乡红鲫各个时相卵母细胞中的表达有差异，在第2时相卵母细胞中没有表达，在第3时相开始表达，最初出现在细胞质中靠近细胞膜的位置，第4时相MAPK的表达量迅速增加，并几乎充满着整个细胞质，第5时相MAPK不仅分布在细胞质中，还向核区迁移，以上结果显示MAPK是从细胞质靠近卵膜部分逐渐向细胞核处迁移，且在第3时相开始表达直到第5时相（受精结束）后消失。暗示MAPK在萍乡红鲫卵母细胞的减数分裂中起调控第一次减数分裂阻滞启动的作用。

目录

声明

摘要

缩写词

本实验主要实验仪器及试剂

第1章 引言

1．1 鱼类原始生殖细胞的研究概述

1．1．1 原始生殖细胞(PGCs)的特征和结构特点

1．1．2 原始生殖细胞的起源

1．1．3 原始生殖细胞的迁移路径和方式

1．1．4 原始生殖细胞的迁移机制

1．1．5 鱼类原始性腺别分化的研究

1．2 鱼类卵母细胞周年发育研究

1．2．1 卵母细胞发育分期标准

1．2．2 卵母细胞发育过程中的结构

1．3 丝裂原活化蛋白激酶在鱼类卵母细胞减数分裂中的作用

1．3．1 MAPK概述

1．3．2 卵母细胞减数分裂阻滞

1．3．3 MAPK在鱼类卵母细胞减数分裂过程中的作用

1．4 萍乡红鲫的研究进展

1．4．1 萍乡红鲫介绍

1．4．2 萍乡红鲫生物学研究

1．5 研究的目的和意义

第2章 萍乡红鲫原始生殖细胞的起源迁移及分化过程

2．1 材料与方法

2．1．1 实验材料

2．1．2 实验方法

2．1．3 实验步骤

2．2 结果

2．2．1 萍乡红鲫PGCs的特征

2．2．2 萍乡红鲫PGCs的迁移路径

2．3 讨论

2．3．1 萍乡红鲫原始生殖细胞的迁移路径

2．3．2 萍乡红鲫性腺分化

第3章 萍乡红鲫卵母细胞周年发育研究

3．1 材料与方法

3．1．1 实验材料

3．1．2 实验方法

3．1．3 实验步骤

3．2 结果

3．2．1 核质比分析

3．2．2 卵母细胞发育时相划分

3．2．3 卵巢发育分期

3．3 讨论

3．3．1 核质比分析

3．3．2 产卵类型

第4章 MAPK在萍乡红鲫卵母细胞中的表达和定位

4．1 材料与方法

4．1．1 实验材料

4．1．2 实验试剂配备

4．1．3 实验方法

4．1．4 免疫组织化学实验

4．1．5 冰冻切片染色

4．2 结果

4．3 讨论

第5章 结论与展望

致谢

参考文献