miR-126靶向血管内皮生长因子A调控胃癌血管新生的作用及其机制

摘要

目的：随着人类肿瘤研究的深入，肿瘤血管新生在决定肿瘤生长、增殖、侵袭及转移的过程中起至关重要的作用现已为人熟知。在肿瘤的生长、转移过程中，血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor, VEGF）家族扮演着重要的角色，它在肿瘤组织血管内皮细胞、淋巴管内皮细胞的分裂增殖过程中起关键作用，是目前活性最强、专属性最高的血管生成因子，在肿瘤血管生成中处于核心地位，VEGF家族有7个成员，即:VEGFA、VEGFB、VEGFC、VEGFD、VEGFE、svVEGF及胎盘生长因子。其中VEGFA在血管生成中发挥最重要的作用。大量的研究包括我们前期的研究发现，胃癌(Gastric cancer GC)过高表达VEGF和VEGFR，其过表达与胃癌的血管新生及恶性表型密切相关，是胃癌预后的独立预测因素。Feng R等研究发现，与正常组织相比较，miR-126在胃癌组织中有着明显的低表达，并且这种低表达与肿瘤的临床特征，包括肿瘤大小、淋巴结转移、局部侵犯及TNM阶段密切相关。但目前有关miR-126靶向VEGFA调控胃癌血管新生的作用及具体机制尚未见报道。我们研究拟通过建立稳定的miR-126过表达和抑制表达的GC细胞系，来分析GC细胞系PI3K/Akt和MAPK/Erk两条信号通路上核心蛋白、VEGFA与miR-126之间的关系，从而来阐明GC细胞中miR-126的表达与胃癌血管新生的关系。
　　方法：⑴细胞系的选择:来源于南昌大学消化研究所的共四株细胞系，分别为SGC-7901、MKN-45、AGS、MKN-28细胞，通过荧光定量PCR检测它们miR-126的表达量。⑵预处理GC细胞的miR-126表达的检测:荧光定量PCR检测在MKN-28、SGC-7901、MKN-45细胞预处理之后的miR-126的表达。⑶GC细胞系实验:分空白组、miR-126慢病毒实验组、慢病毒对照组、miR-126寡核苷酸抑制组与寡核苷酸对照组共五组。利用上述预处理分别诱导和抑制胃癌细胞miR-126的表达，在处理之后72h提取细胞蛋白，通过Western Blot检测分析预处理对Akt、mTOR、Erk1/2、VEGFA蛋白表达的影响。
　　结果：①通过荧光定量PCR检测四株胃癌细胞系miR-126的表达量由高到低依次为AGS＞MKN-45＞SGC-7901＞MKN-28。②Lenti-miR-126处理GC细胞之后，miR-126的表达明显高于空白对照组及慢病毒对照组(p＜0.01);相反，LNA-miR-126处理GC细胞后，miR-126的表达明显低于空白对照组及寡核苷酸对照组(p＜0.01)。③在MKN-28、SGC-7901、MKN-45细胞中，miR-126的高表达可抑制Akt、mTOR、Erk1/2、VEGFA蛋白表达(p＜0.05或0.01)，相反，miR-126低表达可促进Akt、mTOR、Erk1/2、VEGFA蛋白表达(p＜0.05或0.01)。
　　结论：推测在胃癌细胞中miR-126靶向作用于VEGFA通过PI3K/Akt和（或）MAPK/Erk信号通路可能参与调节胃癌血管新生。

目录

声明

摘要

中英文缩略词表

第1章 引言

第2章 材料与方法

2．1 材料

2．1．1 细胞株

2．1．2 主要仪器

2．1．3 主要试剂

2．1．4 主要试剂配制

2．2 方法

2．2．1 细胞培养

2．2．2 荧光定量PCR检测GC细胞系miR-126的相对表达量

2．2．3 慢病毒转染GC细胞的预实验及实验分组

2．2．4 Western blot检测GC细胞Akt、mTOR、Erk1／2、VEGFA的表达

2．3 统计学处理

第3章 结果

3．1 MKN-28、SGC-7901、MKN-45、AGS细胞系miR-126的表达水平

3．2 MKN-28、SGC-7901、MKN-45细胞慢病毒感染的最佳MOI值确定

3．3 慢病毒及寡核苷酸转染GC细胞后miR-126表达的检测

3．4 在GC细胞中，miR-126对Akt、mTOR、Erk1／2、VEGFA表达的影响

第4章 讨论

4．1 VEGFA与血管新生的关系及其机制

4．2 miR-126靶向VEGFA调控胃癌血管新生的研究

第5章 结论

5．1 结论

5．2 展望

致谢

参考文献

附图

综述