粒细胞集落刺激因子(g-CSF)对脓毒症小鼠免疫功能的影响

摘要

目的:
　　观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)治疗后脓毒症小鼠中性粒细胞表面抗原CD64表达率、血清TNF-α、IL-10浓度及小鼠1周生存率的变化，探索G-CSF对脓毒症小鼠免疫功能的影响，为G-CSF治疗脓毒症的研究提供理论基础。
　　方法:
　　1、实验动物:10-12周龄（体重18-25克）健康的雄性昆明小鼠140只。
　　2、动物模型:采用腹腔内注射LPS的方法建立脓毒症小鼠模型。
　　3、实验分组及处理:将小鼠随机分为四组，每组共35只:A组（健康对照组）腹腔内一次性注射与B组同等剂量的生理盐水;B组（脓毒症模型组）腹腔内一次性注射10mg/kg剂量的LPS;C组（空白治疗组）于腹腔注射LPS后6h、30h皮下注射与D组同等剂量的生理盐水;D组（G-CSF治疗组）于腹腔注射LPS后6h、30h皮下注射50ug/kg剂量的重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)。每组随机抽取10只，观察各组小鼠的一般情况及1周生存率，并绘制生存率曲线;每组的其余25只，于建模后12h、24h、36h、48h、60h时间点各取5只小鼠，采集外周血用于检测。
　　4、实验方法:采用流式细胞技术(FCM)检测小鼠外周血中性粒细胞表面抗原CD64的表达率(％);采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清TNF-α及IL-10的浓度(pg/ml)。
　　5、统计学方法:采用Excel2003和SPSS18.0统计软件处理实验数据，进行统计分析。
　　结果:
　　1、小鼠注射LPS后均出现了明显的中毒症状，G-CSF治疗组小鼠较脓毒症模型组及空白治疗组小鼠症状恢复更快。脓毒症模型组及空白治疗组小鼠1周生存率均为50％，G-CSF治疗组小鼠1周生存率为60％，G-CSF治疗组小鼠生存率较脓毒症模型组及空白治疗组略有增加，差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　2、健康对照组小鼠各时间点中性粒细胞表面抗原CD64仅少量表达。脓毒症组小鼠在LPS注射后12h中性粒细胞表面抗原CD64表达率即达到峰值(45.51±3.32)％，相比于健康对照组（2.69±1.00％）显著升高(P＜0.05)。24h时下降至（24.07±3.51％），36h、48h、60h时中性粒细胞表面抗原CD64呈低水平表达，但仍显著高于健康对照组(P＜0.05)。给予G-CSF治疗后，小鼠各时间点中性粒细胞表面抗原CD64均有较高的表达率，与脓毒症模型组及空白治疗组比较显著升高(P＜0.05)。
　　3、脓毒症模型组小鼠在LPS注射后12h血清TNF-α浓度为（203.38±15.33pg/ml），相比于健康对照组显著升高（P＜0.05），24h达到（348.77±21.12pg/ml）的峰值，48h才出现明显的下降，60h仍显著高于健康对照组(P＜0.05)。给予G-CSF治疗后，各时间点TNF-α浓度较脓毒症模型组及空白治疗组显著下降(P＜0.05)。
　　4、脓毒症组小鼠在LPS注射后12h血清IL-10浓度为（54.35±7.32pg/ml），相比于健康对照显著升高(P＜0.05)，36h时达到（143.04±13.08pg/ml）的峰值，然后逐渐下降，60h仍显著高于健康对照组(P＜0.05)。给予G-CSF治疗后，其24h、36h、48h时间点IL-10浓度分别为:160.35±12.41pg/ml、177.74±13.75pg/ml、126.09±9.77pg/ml，较脓毒症模型组及空白治疗组显著升高(P＜0.05)，12h、60h时间点IL-10浓度较脓毒症模型组及空白治疗组略有升高，差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　结论:
　　1、中性粒细胞表面抗原CD64在健康小鼠中仅少量表达，给予LPS后中性粒细胞表面抗原CD64表达率呈一过性增高，提示中性粒细胞表面抗原CD64表达增加可作为中性粒细胞活化的标志。
　　2、脓毒症早期血清TNF-α及IL-10均出现升高，提示脓毒症同时存在促炎反应及抗炎反应过程;血清IL-10浓度的峰值出现较TNF-α晚，推测抗炎反应可能继发于促炎反应。
　　3、G-CSF可以促进脓毒症小鼠中性粒细胞表面抗原CD64的表达，提示G-CSF具有增强脓毒症小鼠中性粒细胞功能的作用。G-CSF可以降低脓毒症小鼠血清的TNF-α的浓度，增加其血清IL-10的浓度，提示G-CSF具有抗炎的作用。G-CSF不能改善脓毒症小鼠的生存率，也不会增加脓毒症小鼠的死亡率。

目录

声明

摘要

中英文缩略词

第1章 引言

第2章 材料与方法

2．1 材料

2．1．1 实验动物

2．1．2 主要药物或试剂

2．1．3 仪器和设备

2．2 方法

2．2．1 脓毒症模型的建立

2．2．2 标本采集及保存

2．2．3 实验分组及处理

2．2．4 流式细胞仪检测外周血中性粒细胞表面抗原CD64的表达

2．2．5 血清TNF-α及IL-10的检测

2．2．6 统计学处理

第3章 结果

3．1 各组小鼠的一般情况及1周生存率

3．2 各组小鼠中性粒细胞表面抗原CD64表达率变化

3．3 各组小鼠血清TNF-α浓度变化

3．4 各组小鼠血清IL-10浓度变化

第4章 讨论

4．1 脓毒症动物模型的建立

4．2 脓毒症病理生理机制认识的变化

4．3 脓毒症免疫抑制的细胞学机制

4．4 脓毒症时中性粒细胞表面抗原CD64表达率的变化

4．5 脓毒症时炎症因子的变化

4．6 G-CSF在脓毒症中的应用

第5章 结论

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述 脓毒症免疫抑制的机制及治疗的研究进展