吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)在肺癌中的表达及其与肿瘤血管形成关系的初步研究

摘要

目的：
　　本实验主要探索IDO1在肺癌组织中的表达水平，并分析肿瘤微环境中IDO1与肿瘤血管形成之间的关系,为肿瘤的治疗提供新思路。
　　方法：
　　1、由南昌大学第二附属医院提供2013-2014期间手术切除肺癌石蜡切片41例，所有病例均得到手术后确切的病理诊断。免疫组织化学法检测IDO1、CD31、CD34、FactorⅧ的表达水平，统计 IDO1与部分临床病理特征的关系及分析IDO1表达水平的高低与MVD的关系。
　　2、利用转染技术建立过表达 IDO1的人肺腺癌上皮 A549细胞系，并用Western-blot方法检测其转染效率。MTT细胞计数法计量过表达IDO1 A549细胞的增殖情况，细胞侵袭实验检测过表达IDO1 A549细胞侵袭能力的变化。
　　3、利用Transwell小室建立过表达IDO1 A549细胞与HUVEC细胞共培养模型，MTT细胞计数法检测共培养后HUVEC细胞的增殖情况，基质胶成管实验观察HUVEC细胞形成管样结构数量的变化，酶联免疫吸附法及实时荧光定量PCR分别从细胞因子水平及mRNA水平检测HUVEC细胞分泌VEGF量的变化。
　　4、数据处理：统计学分析：采用SPSS19.0统计软件进行分析。独立实验的数据采用Mean±SD表示，多因素分析采用卡方检验，实验组与对照组的组间差异比较采用t检验分析，P<0.05为差异具有统计学意义。
　　结果：
　　1、免疫组化结果显示肺癌组织中 IDO1蛋白表达率为60.9％，低表达或者不表达率为39.1%。肺癌组织中IDO1表达水平与CD34、FactorⅧ标记的MVD呈正相关关系（r=0.333, r=0.342），与CD31标记的MVD不相关。
　　2、Western-blot结果显示:A549细胞经转染后过表达 IDO1的转染效率为41.6%。
　　3、MTT细胞计数法检测过表达IDO1 A549细胞的增殖实验发现，过表达IDO1 A549细胞较空白对照组、阴性对照组增殖速度加快。
　　4、侵袭实验结果显示：过表达IDO1 A549细胞较空白对照组、阴性对照组增侵袭能力增强。
　　5、利用Transwell小室建立过表达IDO1 A549细胞与HUVEC细胞共培养模型，MTT细胞计数法检测共培养后HUVEC细胞增殖速度加快。
　　6、基质胶成管实验显示：共培养后HUVEC细胞形成管样结构能力明显增加，6h形成管样结构，12h管样结构最为明显且数量最多，24h后管样结构逐渐消失。
　　7、酶联免疫吸附法及实时荧光定量PCR分别从细胞因子水平及mRNA水平检测共培养后 HUVEC细胞分泌 VEGF的含量，结果显示过表达 IDO1A549细胞与 HUVEC细胞共培养组分泌的 VEGF含量明显高于其他组，并随时间的变化VEGF的含量逐渐增加。
　　结论：
　　1、本实验免疫组化结果显示肺癌组织中IDO1表达的水平与CD34、FactorⅧ标记的MVD呈正相关关系，与CD31标记的MVD无关。
　　2、过表达 IDO1的 A549细胞部分生物学特性发生变化，其增殖与侵袭能力明显增加。
　　3、利用Transwell小室建立过表达IDO1A549细胞与HUVEC细胞共培养模型，显示共培养后的 HUVEC细胞增殖能力及形成管样结构能力明显增强且mRNA水平、细胞因子水平上分泌VEGF的量明显增多。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

中英文缩略词表

第1章 引言

1.1 IDO与肿瘤免疫耐受

1.2肿瘤与肿瘤血管

1.3 IDO对肿瘤血管形成的影响

第2章 材料与方法

2.1试剂与设备

2.2 实验方法

第3章 结果

3.1 S-P法免疫组织化学染色

3.2 Western-blot检测IDO1转染效率

3.3过表达IDO1 A549细胞生长曲线

3.4过表达IDO1 A549细胞侵袭结果

3.5过表达IDO1 A549细胞对HUVEC细胞生长的影响

3.6基质胶成管

3.7 q-PCR检测VEGF

3.8 ELISA检测VEGF

第4章 讨论

4.1 IDO1在肺癌中的表达及与MVD的关系

4.2 过表达IDO1对A549细胞部分生物学特征的影响

4.3 IDO1在体外血管形成中的作用

第5章 结论

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述: IDO1对肿瘤免疫耐受及肿瘤血管的影响