慢病毒介导RNAi沉默IL-1β、TNF-α治疗创伤后关节炎的研究

摘要

背景与目的：
　　创伤后关节炎(Post- traumatic arthritis，PTA)继发于严重的关节创伤，随病程的自然进展，最终将发展成骨性关节炎（Osteoarthritis,OA），较之传统的退行性骨性关节炎，这类患者年龄往往偏轻。本研究旨在探讨使用慢病毒作为载体的RNA干扰技术（RNAi）沉默兔滑膜细胞白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达，并进一步治疗PTA的可行性。
　　方法：
　　（1）按研究团队前期实验中设计并验证了干扰效果的siRNA序列，分别合成TNF-α-siRNA和IL-1β-siRNA重组慢病毒；2）选取48只新西兰大白兔，对双侧膝关节行创伤后关节炎造模术，造模成功后平均分成 A、B、C、D共4组，每组12只。将已合成的TNF-α-siRNA和IL-1β-siRNA重组慢病毒转染正常兔膝关节滑膜细胞,取稳定转染的滑膜细胞对模型兔进行膝关节腔注射：A组为对照组，注射正常滑膜细胞；B组TNF-α组，注射转染了TNF-α-siRNA重组慢病毒的滑膜细胞；C组IL-1β组，注射转染了IL-1β-siRNA重组慢病毒的滑膜细胞；D组共转染组，注射同时转染了TNF-α-siRNA及IL-1β-siRNA重组慢病毒的滑膜细胞。每组分别于注射后第1、2、4周处死4只实验兔获取膝关节软骨及关节液。采用Mankin评分评价软骨组织病理学改变；ELISA法检测关节滑液中TNF-α、IL-1β表达。
　　结果:
　　（1）与对照组相比，B、C、D组软骨损伤程度减轻的同时退变加剧速度得到缓解， D组缓解作用最明显,Mankin评分差异有统计学意义（P＜0.01）。（2）较之对照组，B组TNF-α表达减少（P＜0.01），C组IL-1β表达减少（P＜0.01）， D组TNF-α、IL-1β表达均减少（P＜0.01）；D组较之B组、C组TNF-α、IL-1β表达减少（P＜0.01）。
　　结论：
　　采用慢病毒介导的 RNA干扰可以靶向抑制关节液中相应炎性因子（TNF-α、IL-1β）表达，延缓关节软骨退行性改变，当两种siRNA共同转染时可起到协同作用，本研究为创伤后关节炎的基因沉默治疗提供了理论基础。

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中英缩略词表

第1章 前言

1.1 创伤后关节炎的病理机制

1.2 创伤后关节炎的治疗策略

1.3 基因治疗在创伤后关节炎的应用

1.4 研究目的和意义

第2章 材料与方法

2.1 主要试剂和药物

2.2 主要试验仪器

2.3 主要试剂配制方法:

2.4 实验方法

第3章 结果

3.1 重组慢病毒合成与包装

3.2 软骨组织学改变

3.3 软骨Mankin评分

3.4 TNF-α、IL-1β在关节液中表达情况（ELISA）

第4章 讨论

第5章 结论

5.1 结论

5.2 展望

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述: 关节创伤后的炎性反应与创伤后骨性关节炎