SOCS1/3对TLR3、Tfh细胞分化的调控及其在HT中的作用

摘要

目的：
　　1.通过检测HT患者甲状腺组织中SOCS1/3、TLR3蛋白的表达及外周血中SOCS1/3、TLR3mRNA的表达，探讨SOCS1/3、TLR3在HT发病中的作用及具体机制；
　　2.通过检测 HT患者外周血中 Tfh细胞占淋巴细胞的百分比和特征性转录因子Bcl6mRNA的表达，探讨Tfh细胞在HT中的作用；
　　方法：
　　1.选取30例HT患者、10例GD患者及10例正常的甲状腺组织标本，采用免疫组化法（IHC）检测SOCS1/3及TLR3蛋白在各组甲状腺组织的表达与定位，并对结果进行半定量评分；
　　2.收集30例HT患者、30例GD患者及30例正常人的外周血，Ficoll密度梯度离心法分离 PBMC，提取 PBMC中总 RNA，实时荧光定量 PCR检测SOCS1/3、TLR3mRNA的表达量；
　　3.流式细胞术检测30例HT患者、30例GD患者及30例正常人外周血中CD4+CXCR5+T细胞（Tfh细胞）占淋巴细胞的百分比；Ficoll密度梯度离心法分离外周血PBMC，实时荧光定量PCR检测Bcl6mRNA的相对表达量；
　　结果：
　　1. TLR3蛋白在GD组及正常组甲状腺组织几乎不表达，在HT组主要表达部位在滤泡上皮细胞的胞浆内，且HT组表达量明显高于GD组及正常组，差异有统计学意义（P＜0.05）；
　　2. SOCS1/3蛋白在GD组、正常组甲状腺组织中有少量表达，主要表达部位在滤泡上皮细胞的胞浆，而在HT组的表达较GD组及正常组明显，差异有统计学意义（P＜0.05）；
　　3.外周血PBMC中TLR3、SOCS1/3 mRNA的相对表达量在HT组均高于GD组和正常组，差异有统计学意义（P＜0.05）；
　　4. HT组患者外周血中Tfh细胞百分比高于GD组及正常组，差异具有统计学意义（P＜0.05），HT组外周血PBMC中Bcl6mRNA的相对表达量高于其余两组，差异有统计学意义（P＜0.05）；
　　5. HT患者外周血PBMC中SOCS1mRNA的相对表达量与血清TGAb水平呈负相关（r=-0.393），与TPOAb、FT3、FT4、TSH均无相关性（均P＞0.05）；
　　6.HT患者外周血PBMC中TLR3、SOCS3mRNA的相对表达量与血清TGAb、TPOAb、FT3、FT4、TSH均无相关性（均P＞0.05）；
　　7.HT组患者外周血中Tfh细胞的比例与血清中自身抗体TGAb水平呈正相关（r=0.380），与TPOAb水平呈正相关（r=0.374），与FT3、FT4、TSH均无相关性（P＞0.05）；HT组外周血PBMC中Bcl6 mRNA的相对表达量与TGAb、TPOAb均无相关性（P＞0.05）；
　　8. SOCS1与TLR3蛋白在HT患者甲状腺组织中的表达无相关性（P＞0.05）；SOCS3与TLR3蛋白在HT患者甲状腺组织中的表达无相关性（P＞0.05）；
　　9. HT患者外周血 PBMC中 SOCS1与 TLR3mRNA的表达量呈正相关（r=0.586）；而SOCS3与TLR3 mRNA的表达无相关性（P＞0.05）；
　　10. HT组SOCS1/3 mRNA的相对表达量与Tfh细胞比例均无相关性（均P＞0.05）；HT组SOCS1/3 mRNA的相对表达量与Bcl6mRNA表达均无相关性（均P＞0.05）；
　　结论：
　　1.HT患者外周血及甲状腺组织中TLR3、SOCS1/3的表达量较对照组升高，提示TLR3和SOCS1/3都可能参与HT的发生；
　　2.HT患者外周血中Tfh细胞比例、Bcl6mRNA表达量较对照组升高，提示Tfh细胞可能参与了HT的发病；
　　3.HT患者外周血Tfh细胞百分比与自身抗体TGAb、TPOAb滴度呈正相关，提示Tfh细胞可能与HT患者B细胞产生自身抗体有一定关系。

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第1章 引言

第2章 材料与方法

2.1 病例资料

2.1.1 病理资料收集

2.1.2 临床资料收集

2.2 主要材料与试剂

2.3 实验主要仪器和设备

2.4 主要试剂的配制

2.5 实验方法

2.5.1 IHC法检测甲状腺组织中TLR3、SOCS1和SOCS3蛋白的表达和定位

2.5.2 流式细胞术检测外周血淋巴细胞中Tfh细胞百分比

2.5.3 Ficoll密度梯度离心法分离外周血PBMC

2.5.4 Trizol抽提外周血PMBC中总RNA

2.5.5 合成cDNA

2.5.6 荧光定量PCR检测外周血PBMC中TLR3、SOCS1、SOCS3、Bcl6 mRNA的相对表达量

2.6 数据处理

第3章 结果

3.1 TLR3、SOCS1/3蛋白在各组甲状腺组织中的表达情况

3.1.1 TLR3蛋白在各组甲状腺组织中的表达情况

3.1.2 SOCS1/3蛋白在各组甲状腺组织中的表达情况

3.2 TLR3、SOCS1/3mRNA在外周血PBMC中的表达情况

3.3 外周血中Tfh细胞比例及Bcl6mRNA的表达

3.4 相关性分析结果

3.4.1 SOCS1、SOCS3与TLR3mRNA的相对表达量与甲状腺功能及自身抗体滴度的相关性分析

3.4.2 Tfh细胞比例与甲状腺功能及自身抗体滴度相关性分析

3.4.3 Bcl6mRNA表达量与自身抗体滴度的相关性分析

3.4.4 SOCS1、SOCS3与TLR3蛋白在HT组甲状腺组织中表达量的相关性分析

3.4.5 SOCS1、SOCS3与TLR3在HT组外周血PBMC中表达的相关性分析

3.4.6 SOCS1、SOCS3表达与Tfh细胞比例、Bcl6表达的相关性分析

第4章 讨论

第5章 结论与展望

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述:SOCS1/3在桥本甲状腺炎中的作用