江西省念珠菌血症致病真菌的鉴定、药物敏感性及多位点序列分型特征

摘要

目的：1、通过对南昌大学第一附属医院住院念珠菌血症患者的病原真菌的分离、分子鉴定及对抗真菌药物的药物敏感性试验，了解江西省念珠菌血症患者中，各念珠菌的构成比及对抗真菌药物的耐药状况，指导临床抗真菌药物的使用；2、利用多位点序列分型（MLST）对念珠菌血症的常见致病菌白念珠菌和热带念珠菌进行基因分型。了解对江西省念珠菌血症致病性真菌的流行病学特征。
　　方法：收集血培养阳性且在显微镜下可观察到细长菌丝或芽孢或假菌丝等真菌形态的标本。将标本用沙保弱葡萄糖琼脂培养基培养，分离、纯化菌株，挑取平板上出现白色或乳白色表面光滑略有粘性菌落。用科玛嘉显色培养基进行菌株的初步筛选，保存菌株。用扩增真菌的转录间隔间区(ITS区)和核糖体大亚基(26rRNA、D1/D2区）、基因测序对初筛的菌株进行标准的分子生物学鉴定；然后，利用美国临床试验标准化研究所颁布的微量液基稀释法抗真菌药物敏感试验方案M27-A3测定这些菌株对常见抗真菌药物的敏感性。利用多位点序列分型（MLST）对念珠菌血症的常见致病菌白念珠菌和热带念珠菌进行基因分型。
　　结果：共收集52株念珠菌血症的病原真菌，其中热带念珠菌17株，占32.7％；白念珠菌16株，占30.8%；近平滑念珠菌复合体16株，占30.8%；光滑念珠菌3株，占5.7%。16株近平滑复合体包括14株近平滑念珠菌和2株拟近平滑念珠菌，分别占26.9%、3.9%。6株念珠菌（1株白念珠菌、5株热带念珠菌）对氟康唑耐药；7株念珠菌（4株白念珠菌、3株热带念珠菌）对伊曲康唑为非野生型；5株念珠菌（1株白念珠菌、3株热带念珠菌、1株光滑念珠菌）对伏立康唑耐药；4株念珠菌（3株白念珠菌、1株热带念珠菌）对泊沙康唑为非野生型；2株念珠菌属（1株白念珠菌、1株热带念珠菌）同时对氟康唑、伏立康唑和伊曲康唑耐药。17热带念珠菌产生13个新的二倍体序列型。16个白念珠菌产生16个新的二倍体序列型。
　　结论：1.白念珠菌、热带念珠菌和近平滑念珠菌仍是念珠菌血症的主要致病菌。在江西省热带念珠菌是念珠菌血症的最常见致病菌。
　　2.念珠菌血症的致病真菌对米卡芬净、卡泊芬净和两性霉素B的敏感性最高。对氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑的敏感性降低，其中氟康唑和伏立康唑尤为明显。
　　3.江西省的热带念珠菌、白念珠菌的二倍体序列型都为新发的基因型，未发现流行的克隆株。

目录

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中英文缩写词表

第1章 引言

第2章 材料与方法

2.1.材料

2.2.主要试剂

2.3.主要仪器

2.4.方法

第3章 结果

3.1. 基本资料

3.2.菌株的鉴定

3.3.七种抗真菌药物体外药敏试验

3.4.白念珠菌的多位点序列分型

3.5.热带念珠菌的多位点序列分型

第4章 讨论

4.1.念珠菌血症患者的基本情况分析

4.2.念珠菌血症病原菌的鉴定

4.3.念珠菌血症病原菌的体外药敏试验

4.4.念珠菌血症常见病原菌的多位点序列分型

第5章 结论与展望

5.1.结论

5.2.进一步工作计划与展望

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述:白念珠菌的基因分型方法的研究进展